Manuscrit - laboratoire PROTEE - Université du Sud - Toulon - Var

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jusqu'à la mer des Sargasses A et pour le MAB Shelf break (Vodacek et al., 1997)
Pour avoir des informations plus complètes sur les fluorophores présents en solution, il est
nécessaire d’observer plus de longueurs d’onde, ce qui est le cas des spectres de fluorescence 2D.
II.B.1.c Spectres 2D (émission, excitation et synchrone)
En fixant une longueur d’onde d’excitation λEX et en mesurant l’intensité de fluorescence en fonction
de la longueur d’onde d’émission λEM, on obtient un spectre d’émission de fluorescence 2D (Figure
12) (Ryan et Weber, 1982). Les spectres d’excitation quant à eux sont obtenus en fixant la longueur
d’onde d’émission λEM et en balayant les longueurs d’onde d’excitation λEX (Ghosh, 1980, Mafra et
al., 2007). Pour les spectres synchrones, les longueurs d’onde d’excitation λEX et d’émission λEM
varient simultanement avec une différence définie le plus souvent par : ∆λ=λEM-λEX (Lloyd, 1971 ;
Vo-Dinh, 1981 ; Galapate et al., 1998 ; Peuravuori et al., 2002 ; Reynolds, 2003 ; Fuentes et al.,
2006 ; Hua et al., 2007 ; Yang et al., 2008), et parfois par une fonction reliant λEM et λEX.
Intensité de fluorescence
Longueur d’onde
Figure 12: Exemple de spectre 2D d’émission pour l’AH extrait
à λEX=350 nm avec λEM variant de 300 à 600 nm.
II.B.1.d Matrice de fluorescence 3D
La méthode revient à construire une matrice d’intensité de fluorescence à partir des spectres
d’émission (excitation) mesurés à différentes longueurs d’onde d’excitation (émission)
respectivement. Par la suite, on peut représenter la matrice d’excitation et d’émission de
fluorescence (MEEF) sous forme d’image en fausses couleurs ou bien sous forme de carte
d’intensités symbolisées par des courbes de niveaux (Figure 13, a). Cette matrice est aussi appelée
par certains auteurs le spectre de luminescence ou fluorescence totale (Plaza et al., 2005).
Bien évidemment, une MEEF contient, par construction, l’ensemble des spectres d’émission pour
différentes longueurs d’onde d’excitation, mais également des spectres d’excitation et des spectres
synchrones tels qu’ils ont été définis. Ceci est illustré par la Figure 13, qui montre un spectre
d’émission, un spectre d’excitation et un spectre synchrone extraits à partir d’une MEEF.
Sur les MEEF, on observe systématiquement des intensités fortes à λEM=λEX et dans une moindre
mesure λEM = 2λEX. Ces signaux correspondent à la diffusion élastique des OEM incidentes par les
molécules du solvant. Ce phénomène est un phénomène physique inévitable qui est minimisé par