ATTI DEL XV CONVEGNO NAZIONALE SIPI Società Italiana di ...

Abstract Comunicazioni
IMMUNIZZAZIONE DI STADI GIOVANILI DI BRANZINO (DICENTRARCHUS
LABRAX) CON UN VACCINO COMMERCIALE CONTRO LA VIBRIOSI:
MONITORAGGIO DELLA RISPOSTA IMMUNITARIA MEDIANTE E.L.I.S.A. E
CHEMILUMINESCENZA.
Bulfon C., Volpatti D., Contessi B., Galeotti M.
Dipartimento di Scienze Animali, Facoltà di Medicina Veterinaria, Università degli Studi
di Udine.
Il branzino (Dicentrarchus labrax) è una delle specie più sensibili alle infezioni provocate
da Vibrio anguillarum e numerosi sono i vaccini commerciali che offrono un'efficace
protezione nei confronti di questo patogeno.
Nell‟ambito di un ampio progetto di ricerca (PRIN 2006) finalizzato a valutare lo sviluppo
funzionale del sistema immunitario di questa specie ittica e le sue implicazioni nella
vaccinazione, una formulazione commerciale contro la vibriosi è stata somministrata ad
avannotti e giovanili di branzino al fine di monitorare la modulazione di alcuni parametri
di risposta immunitaria.
Avannotti e giovanili di branzino sono stati immunizzati con un vaccino commerciale
contro V. anguillarum (AquaVAC Vibrio VAB, biotipo 01 e 02, Schering Plough)
adottando un protocollo di somministrazione per bagno (immersione per 60 sec in
sospensione diluita 1:10), seguito da richiamo per via intraperitoneale (0,1 ml/soggetto).
Nel corso della prova sono stati effettuati prelievi di siero ed organi linfatici (milza e rene
anteriore) da soggetti di controllo e vaccinati di 95, 165, 233 e 291 gg.
Mediante saggio E.L.I.S.A. è stata studiata la risposta anticorpale specifica nei confronti di
V. anguillarum sierotipo 01 e 02 (ceppo 77/I03 e ceppo 32/ITT; IZSVe) e del vaccino
commerciale stesso. Mediante saggio di chemiluminescenza in micropiastra (luminol) è
stata valutata l'attività di “burst” ossidativo dei leucociti purificati da milza e rene, indotta
da stimoli quali: phorbol myristate acetate (PMA); Micrococcus luteus; lipopolisaccaride
da Escherichia coli (LPS); vaccino AquaVAC Vibrio VAB.
Le analisi condotte sui campioni di siero hanno evidenziato un sensibile incremento degli
anticorpi specifici per V. anguillarum nei soggetti immunizzati due volte tramite
immersione, e un incremento consistente in quelli successivamente sottoposti al richiamo
per via intraperitoneale. Il saggio E.L.I.S.A. messo a punto e utilizzato per tale finalità è
risultato più sensibile rivestendo la micropiastra con la sospensione batterica ottenuta dal
vaccino, rispetto alla sospensione ottenuta in laboratorio dai ceppi 77/I03 e 32/ITT.
Il rilascio di specie reattive dell‟ossigeno (ROS) è stato promosso, rispetto alle colture di
leucociti non stimolati, dal PMA e, in misura minore, da M. luteus. L‟incubazione delle
cellule con LPS e con il vaccino commerciale è apparsa ininfluente. Sono state inoltre
evidenziate differenze nella cinetica di rilascio delle specie reattive dell‟ossigeno, in
funzione del tipo di sostanza stimolante utilizzata.
Inoltre l‟analisi della chemiluminescenza, condotta su leucociti purificati da soggetti di
controllo a diversi stadi di sviluppo (da 95 a 291 gg post schiusa), stimolati con i mitogeni
PMA e M. luteus, ha rivelato una acquisizione di funzionalità, in termini di rilascio di
prodotti reattivi dell‟ossigeno, negli stadi più avanzati di crescita.
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