Contributi poster - PM2012

Studio in-vitro delle modificazioni epigenetiche indotte dall’ esposizione a
particolato fine
Rota Federica 1 , Laura Dioni 1 , Laura Cantone 1 , Matteo Bonzini 2 ,
Valentina Bollati 1 , Pier Albero Bertazzi 1
1 Dipartimento di Medicina del Lavoro, Università di Milano e IRCCS Ospedale Maggiore,
Fondazione Mangiagalli e Regina Elena, Milano, Italia
2 Dipartimento di Medicina Clinica e Sperimentale, Università dell’Insubria, Varese, Italia
Dati per corrispondenza: e-mail: federica.rota@unimi.it
tel: 02/50320143;
INTRODUZIONE: Numerosi studi hanno mostrato che un’esposizione acuta e cronica al
particolato atmosferico (PM10) può essere associata a morte prematura. Gli effetti ipotizzati sulla
base di studi epidemiologici e tossicologici, includono: i) compromissione della crescita polmonare;
ii) sviluppo di una patologia polmonare cronica ostruttiva (BPCO); iii) cancro al polmone, e iv)
sviluppo di asma e allergie. Tuttavia, i meccanismi d’azione tramite i quali il PM causa effetti
negativi sulla salute non sono ancora chiari.
SCOPO: Al fine di indagare il ruolo della metilazione del DNA nel determinare gli effetti
respiratori correlati all’esposizione a PM, abbiamo quantificato i livelli di metilazione di Alu,
LINE-1 e 8 geni infiammatori e cancerogeni (TLR-4, CD14, IFNy, TNFa, RASSF1A, APC, p53,
p16) impiegando la linea cellulare A549 e trattandola con PM10
METODI: Le cellule umane di epitelio alveolare A549 sono state trattate con una miscela standard
complessa di particolato (PM10, NIST, National Institute of Standards and Technology-Standard
Reference Material 1648a). Sono stati eseguiti trattamenti con SRM 1648a utilizzando diverse dosi
(15 μg/ml, 31 μg/ml, 62 μg/ml, 125 μg/ml, 250 μg/ml). Abbiamo usato cellule non trattate come
controllo negativo e considerato solo concentrazioni che non influenzassero significativamente la
vitalità cellulare. Le cellule sono state raccolte dopo 2, 6, 12, 24 e 48 ore di esposizione continua ed
il pellet cellulare è stato conservato a -80 ° C fino all’estrazione del DNA. La metilazione del DNA
(dei geni Alu, LINE-1, TLR-4, CD14, IFNy, TNFa, RASSF1A, APC, p53, p16) è stata studiata per
mezzo di amplificazione con PCR e pyrosequenziamento del DNA trattato con sodio-bisolfito. Gli
elementi ripetuti Alu e LINE-1 sono stati utilizzati per stimare la metilazione globale del DNA.
Tutti gli esperimenti sono stati condotti in triplicato per confermare la ripetibilità dei nostri risultati.
RISULTATI: L’esposizione al PM10 risulta associata ad una diminuzione della metilazione del
gene dell’Interleuchina-6 dopo 48 ore di esposizione al alte dosi (125, 250 μg/ml; P