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Em Foco<br />
PCR: SAIBA MAIS SOBRE A TÉCNICA E COMO MELHORAR<br />
SEUS RESULTADOS<br />
Metodologia se popularizou como uma das principais técnicas de análise para diagnóstico de COVID-19<br />
os), até consumíveis plásticos utilizados como<br />
tubos, placas, tampas e selos.<br />
O uso de materiais impróprios pode interferir<br />
liberando inibidores ou contaminantes na<br />
reação. Por isso, é sempre importante utilizar<br />
materiais confeccionados em plástico homogêneo<br />
e com paredes finas para a melhor<br />
transferência térmica, com certificação de<br />
esterilidade e livres de contaminantes como<br />
DNases, RNases e materiais genéticos.<br />
Reconhecida com o Prêmio Nobel de Química<br />
em 1994, a técnica de Reação em Cadeia de Polimerase<br />
(PCR) proporcionou avanços na pesquisa<br />
científica, principalmente em biologia molecular.<br />
A técnica trouxe benefícios que impulsionaram o<br />
sequenciamento genético para testes de paternidade<br />
e investigações forenses, expressão gênica<br />
em sistemas recombinantes, além do diagnóstico<br />
de doenças e testes de novos medicamentos.<br />
Existem diferentes formas da aplicação<br />
de PCR, entre elas, três se destacam:<br />
PCR Convencional<br />
Consiste na replicação de sequências específicas<br />
de DNA utilizando equipamentos termocicladores.<br />
Para realizar a reação acrescentam-se<br />
às amostras de material genético sequências<br />
iniciadoras complementares (também conhecidas<br />
como primers), desoxirribonucleotídeos e<br />
DNA-polimerase termo resistente.<br />
das em DNA complementar (cDNA) através<br />
da atividade da enzima transcriptase reversa.<br />
Em seguida, os cDNAs recém-sintetizados são<br />
amplificados através dos mesmos procedimentos<br />
descritos na PCR convencional.<br />
Uma vez que a técnica de RT-PCR permite<br />
amplificar amostras de RNA, sua aplicação é<br />
muito utilizada para detecção de doenças genéticas,<br />
patógenos virais e bacterianos.<br />
qPCR<br />
A técnica de PCR quantitativa (qPCR) utiliza os<br />
princípios básicos da PCR com o diferencial que<br />
permite a quantificação do material amplificado<br />
em tempo real. Termocicladores especializados<br />
são capazes de fornecer condições ideias de<br />
temperatura para a amplificação, bem como de<br />
detectar os sinais emitidos por reagentes específicos<br />
à medida que o DNA é amplificado.<br />
A Greiner Bio-One entrega ao mercado materiais<br />
que possibilitam um alto padrão de<br />
qualidade para biologia molecular com materiais<br />
livres de DNase, RNase, DNA humano, não<br />
pirogênicos e não citotóxicos.<br />
Referências:<br />
Zaha, A.; Ferreira, H. B.; Passaglia, L. M. P - Organizadores. Biologia molecular<br />
básica. 5ª ed. Artmed, 2014.<br />
Alberts B.; Johnson A.; Lewis J.; Raff M.; Roberts K.; Walter P. Biologia<br />
molecular da célula. 5ª ed. Artmed, 2010.<br />
Garibyan, L.; Avashia, N. Research Techniques Made Simple: Polymerase<br />
Chain Reaction (PCR), Journal of Investigative Dermatology, 133(3): e6, 2013.<br />
Bustin, S., Benes, V., Nolan, T., & Pfaffl, M. Quantitative real-time RT-PCR<br />
– a perspective, Journal of Molecular Endocrinology, 34(3), 597-601, 2005.<br />
32<br />
<strong>Revista</strong> <strong>Analytica</strong> | Jun/Jul 2020<br />
Através da variação cíclica de temperaturas<br />
realizada pelo termociclador ocorre a desnaturação<br />
das fitas complementares de DNA, o anelamento<br />
de primers com suas regiões específicas<br />
de cada fita e a replicação do fragmento pela<br />
enzima DNA-polimerase. Após realizar um determinado<br />
número de ciclos, obtém-se milhares<br />
de cópias da sequência gênica de interesse.<br />
RT-PCR<br />
Na Polimerase por Transcriptase Reversa<br />
(RT-PCR) as moléculas de RNA são converti-<br />
A grande vantagem dessa aplicação é a rapidez<br />
na obtenção dos resultados. Além disso, é amplamente<br />
utilizada em associação à RT-PCR (qRT-PCR<br />
ou RT-qPCR), principalmente na área diagnóstica.<br />
Para melhores resultados<br />
Como as técnicas de PCR demandam o uso<br />
de altas temperaturas, a realização dessas reações<br />
requer atenção especial na seleção dos<br />
materiais que são utilizados. Esses cuidados<br />
devem envolver desde a seleção dos reagentes<br />
(enzimas polimerases, primers e nucleotíde-<br />
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Code para captar o link, ou visite a área de BioScience<br />
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entre em contato: info@br.gbo.com
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