Text anzeigen (PDF) - bei DuEPublico

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

Materialien und Methoden 40 2.1.4 Gelelektrophorese prüft. Mit Hilfe der Gelelektrophorese wurde das Ergebnis der PCR und des RFLP über- Bei dieser Methode werden die Proben mit einer fluoreszierenden Substanz versetzt und in ein Agarosegel pipettiert. Das Gel befindet sich in einer Elektrophoresekammer. Wird dort ein elektrisches Feld erzeugt, so werden die DNS-Fragmente ihrer elektrischen Teilladung entsprechend innerhalb des Feldes angezogen und legen eine bestimmte Distanz in dem Gel zurück. Die negativ geladene DNS wandert also zum Pluspol. Die zurückgelegte Distanz der Fragmente ist ganz allgemein von der Größe der Mo- leküle, ihrer Teilladung, der angelegten Spannung sowie der Konzentration des Agarose- gels abhängig. Je größer und schwerer die Fragmente sind, desto geringer ist die Distanz, die sie im Gel zurücklegen. Bei jedem Versuch wird ein Längenstandard mitgeführt. Darin sind DNS-Fragmente bekannter Länge enthalten, so dass durch den Vergleich der Lage der experimentell gewonnenen Stücke zu den Banden des Längenstandards ihre Länge bestimmen werden kann. Anschließend wurde das Gel mit UV-Licht bestrahlt und dabei fotografiert. Die Po- sition der Proben wird auf diese Weise anhand fluoreszierender Banden sichtbar gemacht (Abb. 3,4,6,7). 2.1.4.1 Versuchsmaterialien • Elektrophoresekammer Horizon 58 (Gibco BRL) mit passenden • Formen und Kämmen • Spannungsquelle Power Pac 300 (Bio Rad) • UV-Lampe Macro-Vue, UV-25 (Hoefer) • Polaroid-Kamera Photoman (Hoefer) • Polaroid-Film • Agarose (Gibco BRL) • Ethidiumbromid (Sigma) • TBE- Puffer (12,11g Trisma Base, 6,18g Boric acid, 0,74g EDTA, 1l dH 2O) • Längenstandard Φ X174 RF DNS/ Hae III Fragments, GibcoBRL • Gel Loading Solution (SIGMA)
Materialien und Methoden 41 2.1.4.2 Durchführung Für die Herstellung des 2%-igen Gels wurde 6 mg Agarose in 30 ml TBE-Puffer un- ter Hitze verrührt, zweimal aufgekocht und anschließend 0,7 µl Ethidiumbromid (100 µg/ µl) hinzugefügt. Das flüssige Gel wurde dann in die Gelkammer gegossen, ein Gelkamm darauf aufgesetzt und erstarren gelassen. So entstanden Taschen mit 10 µl Volumen. In der Elektrophoresekammer befand sich das Gel in der TBE-Flüssigkeit. Die erste Tasche wurde mit 0,5 µl Längenstandard, 8,5 µl TBE und 1µl Gel Loading Solution ge- füllt. In die weiteren Taschen kamen jeweils 9 µl des PCR-Produktes mit je 1 µl der Gel Loading Solution. Die Elektrophorese lief bei 120mV Gleichstrom für die Dauer von 25 Minuten bei den PCR-Produkten, die aus Leukozyten stammen und für 35 Minuten bei denen, die aus in Paraffin eingebettetem Hirngewebe stammen. Anschließend wurde das im UV-Licht fluoreszierende Ergebnis mit der Polaroid- Kamera fotographiert. Stellte sich heraus, dass eine Probe nicht zu beurteilen war, wurde entweder eine nested-PCR angeschlossen, oder es wurde die PCR erneut mit der doppelten Menge an DNS durchgeführt, wenn zuwenig PCR-Produkt darin enthalten war. War die Beurteilung durch eine zu hohe Menge an PCR-Produkten beeinträchtigt, so wurde die Probe nachträg- lich mit 1 µl sterilem und nucleinasefreiem doppelt destilliertem Wasser verdünnt und an- schließend der Elektrophorese unterzogen. Die Probe wurde aus der späteren Analyse aus- geschlossen, wenn auch diese Maßnahmen zu keinem befriedigenden Ergebnis führten.
Seite 1 und 2: Medizinische Fakultät der Universi
Seite 3 und 4: Inhaltsverzeichnis 3 INHALTSVERZEIC
Seite 5 und 6: Inhaltsverzeichnis 5 3.1.2.4 Cathep
Seite 7 und 8: Einleitung 7 1 EINLEITUNG 100 Jahre
Seite 9 und 10: Einleitung 9 1.2 Pathogenese des Mo
Seite 11 und 12: Einleitung 11 1.2.1.1 Amyloidogene
Seite 13 und 14: Einleitung 13 Abb.1: Die Prozessier
Seite 15 und 16: Einleitung 15 et al., 1995). Eine V
Seite 17 und 18: Einleitung 17 Inzwischen ist die Id
Seite 19 und 20: Einleitung 19 1.3 Diagnose Trotz al
Seite 21 und 22: Einleitung 21 Es ergibt sich • ei
Seite 23 und 24: Einleitung 23 1.4.1 Familiäre Form
Seite 25 und 26: Einleitung 25 Tabelle 1 Genetische
Seite 27 und 28: Einleitung 27 1.4.4 Der Cathepsin D
Seite 29 und 30: Einleitung 29 1.5 Zielsetzung der A
Seite 31 und 32: Materialien und Methoden 31 2.1.2 P
Seite 33 und 34: Materialien und Methoden 33 Danach
Seite 35 und 36: Materialien und Methoden 35 2.1.2.4
Seite 37 und 38: Materialien und Methoden 37 2.1.3.3
Seite 39: Materialien und Methoden 39 Abb. 7
Seite 43 und 44: Materialien und Methoden 43 2.2.1 D
Seite 45 und 46: Materialien und Methoden 45 Sekunde
Seite 47 und 48: Materialien und Methoden 47 • Ame
Seite 49 und 50: Materialien und Methoden 49 Antikö
Seite 51 und 52: Ergebnisse 51 3 ERGEBNISSE 3.1 Klin
Seite 53 und 54: Ergebnisse 53 3.1.1.2 Cathepsin D-G
Seite 57 und 58: Ergebnisse 57 3.1.2 Verteilung der
Seite 59 und 60: Ergebnisse 59 3.1.2.3 Cathepsin D-A
Seite 61 und 62: Ergebnisse 61 3.1.2.5 Cathepsin D-A
Seite 63 und 64: Ergebnisse 63 3.1.3.1 Verteilung de
Seite 65 und 66: Ergebnisse 65 3.1.3.2 Verteilung de
Seite 69 und 70: Ergebnisse 69 3.1.4 Ermittlung des
Seite 71 und 72: Ergebnisse 71 3.1.5 Der Einfluss vo
Seite 73 und 74: Ergebnisse 73 Als nächstes interes
Seite 75 und 76: Ergebnisse 75 Tab. 6a: Verteilungsa
Seite 77 und 78: Ergebnisse 77 3.2.2 Immunhistochemi
Seite 79 und 80: Ergebnisse 79 Abb. 26: Unipolare Ne
Seite 81 und 82: Diskussion 81 4 DISKUSSION 4.1 Best
Seite 83 und 84: Diskussion 83 Betrachtet man die Er
Seite 85 und 86: Diskussion 85 Asso- ziation besteht
Seite 87 und 88: Diskussion 87 4.2 Faktoren, die das
Seite 89 und 90: Diskussion 89 ten, dass die Proben
Seite 91 und 92:
Diskussion 91 4.2.3 Das APOE 4-Alle
Seite 93 und 94:
Diskussion 93 von Multizenter Studi
Seite 95 und 96:
Diskussion 95 barschaft auf demselb
Seite 97 und 98:
Diskussion 97 Nicht-Trägern des Ca
Seite 99 und 100:
Literatur 99 6 LITERATUR 1) Aguzzi
Seite 101 und 102:
Literatur 101 33) Cataldo AM, Barne
Seite 103 und 104:
Literatur 103 65) Hebert LE, Scherr
Seite 105 und 106:
Literatur 105 97) Matsubara M, Yama
Seite 107 und 108:
Literatur 107 128) Redecker B, Heck
Seite 109 und 110:
Anhang 109 7 ANHANG 7.1 Abkürzunge
Seite 111 und 112:
Anhang 111 7.3 Lebenslauf Name: Öz
Alle anzeigen

Text anzeigen (PDF) - bei DuEPublico

Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.

Template löschen?

Als Template speichern?