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Materialien und Methoden 41
2.1.4.2 Durchführung
Für die Herstellung des 2%-igen Gels wurde 6 mg Agarose in 30 ml TBE-Puffer un-
ter Hitze verrührt, zweimal aufgekocht und anschließend 0,7 µl Ethidiumbromid (100 µg/
µl) hinzugefügt. Das flüssige Gel wurde dann in die Gelkammer gegossen, ein Gelkamm
darauf aufgesetzt und erstarren gelassen. So entstanden Taschen mit 10 µl Volumen.
In der Elektrophoresekammer befand sich das Gel in der TBE-Flüssigkeit. Die erste
Tasche wurde mit 0,5 µl Längenstandard, 8,5 µl TBE und 1µl Gel Loading Solution ge-
füllt.
In die weiteren Taschen kamen jeweils 9 µl des PCR-Produktes mit je 1 µl der Gel
Loading Solution.
Die Elektrophorese lief bei 120mV Gleichstrom für die Dauer von 25 Minuten bei
den PCR-Produkten, die aus Leukozyten stammen und für 35 Minuten bei denen, die aus
in Paraffin eingebettetem Hirngewebe stammen.
Anschließend wurde das im UV-Licht fluoreszierende Ergebnis mit der Polaroid-
Kamera fotographiert.
Stellte sich heraus, dass eine Probe nicht zu beurteilen war, wurde entweder eine
nested-PCR angeschlossen, oder es wurde die PCR erneut mit der doppelten Menge an
DNS durchgeführt, wenn zuwenig PCR-Produkt darin enthalten war. War die Beurteilung
durch eine zu hohe Menge an PCR-Produkten beeinträchtigt, so wurde die Probe nachträg-
lich mit 1 µl sterilem und nucleinasefreiem doppelt destilliertem Wasser verdünnt und an-
schließend der Elektrophorese unterzogen. Die Probe wurde aus der späteren Analyse aus-
geschlossen, wenn auch diese Maßnahmen zu keinem befriedigenden Ergebnis führten.