Untersuchungen zur Bedeutung mesenchymaler Stammzellen in ...

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Material und Methoden
Chip (Fa. Amersham) gegeben und ausgewertet. Bei dem Affymetrix-Chip handelt es
sich um den Chip HGU95Av2, auf den mehr als 10000 Oligonukleotide gespottet
sind, bei dem Amersham-Chip handelt es sich um den Human UniSet 20K Bioarray
mit ca. 20000 Genen. Für die Amersham-Chip-Analyse wurde nur cRNA von
unstimulierten und zu Adipozyten differenzierten mesenchymalen Stammzellen
eingesetzt.
Von jedem Gen sind 16 bis 20 unterschiedliche Oligonukleotide auf den Chip
gespottet, wobei wiederum jedes Oligonukleotid zweifach auf dem Chip enthalten ist.
Einmal in korrekter Basenfolge (perfect match), einmal mit einem Basenaustausch
(mismatch). Das Signal, welches durch die Hybridisierung an die mismatch Probe
entsteht, muß von dem Signal, welches durch die Hybridisierung an die perfect
match Probe entsteht, abgezogen werden, um unspezifische Bindungen
auszuschließen.
Das Expressionsmuster folgender Gene wurde ausgewertet und durch eine Real-
Time-PCR bestätigt:
J02611 Apolipoprotein D (ApoD)
AF010316 Prostaglandin E Synthase (PIG12)
M12529 Apolipoprotein E (ApoE)
AF022797 intermediate conductance Ca-activated K-chanel (KCa4)
M68840 Monoaminooxidase A (MAOA)
S81661 Keratinozytenwachstumsfaktor (KGF)
U58515 Chitinase
AL050214 Klon P586H212 DKFZ (DKFZ)
2.2.2 Physikalische Methoden
2.2.2.1 Kontaktwinkelmessung
Der Kontaktwinkel zwischen einer Flüssigkeit und einem Festkörper ist ein Maß für
die energetischen Wechselwirkungen zwischen Festkörper und Flüssigkeit und dient
der Bestimmung und Quantifizierung hydrophiler bzw. hydrophober Eigenschaften
eines Festkörpers.
Zur Kontaktwinkelmessung, die im Fraunhofer Institut für Lasertechnik durchgeführt
wird, wird über eine Kanüle ein Wassertropfen auf das Material aufgetropft und der
Winkel zwischen der Tangente des Wassertropfens und der Materialoberfläche
vermessen (Abb. 6).