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Ergebnisse 119
3.11.4 Nachweis von Nitrit- und N 2 O-Reduktase-Gensequenzen
Eine Amplifikation potentieller Fragmente der spezifischen Gene PSnosZ, nosZ, nirk und
nirS, welche für die bakterielle Denitrifikation benötigt werden und die für die beiden
periplasmatischen Enzyme N 2 O-Reduktase und Nitrit-Reduktase codieren, konnte nur im
Falle der von Pseudomonas aeruginosa isolierten und aufgereinigten genomischen DNA
erreicht werden. Eine Amplifikation von potentiellen nirK-Teilsequenzen konnte dabei nicht
bewirkt werden.
Im Falle der für die PCR eingesetzten genomischen DNA des von Paederus riparius
isolierten Endosymbionten und von Escherichia coli (wurde als Negativkontrolle verwendet)
konnte kein potentielles Signal auf dem Agarosegel sichtbar gemacht werden. Eine mögliche
Befähigung des Paederus-Endosymbionten zur Denitrifikation konnte somit vollständig
ausgeschlossen werden.
Die nachfolgende Abbildung (Abb. 58) zeigt die auf einem Agarosegel sichtbar gemachten
PCR-Produkte, die von den eingesetzten DNA-Isolaten mit den vier verschiedenen
Denitrifikanten-Primerpaaren amplifiziert werden konnten.
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
P. aer. Endos. E. coli
Amplifizierte Nitrit- und N 2 O-Reduktase-
Gensequenzen
Abb. 58: Elektrophoretische Auftrennung amplifizierter potentieller Teilsequenzen der PSnosZ-, nosZ-,
nirK- und nirS-Gene auf einem 1%igen Agarosegel. M (Marker): 50bp-DNA-Leiter (von oben nach
unten in bp: 1000-50 in 50er Schritten). Die einzelnen Bahnen des Gels sind mit Abkürzungen der
jeweiligen Organismen beschriftet, von denen die genomische DNA isoliert und für die Touch-Down-
PCR eingesetzt wurde (P. aer.: genomische DNA von Pseudomonas aeruginosa; Endos.: des
Endosymbionten von Paederus riparius; E. coli: von Escherichia coli). Gleiche Zahlen über den
einzelnen Bahnen des Gels (jeweils 1-4) entsprechen dabei jeweils einem von vier eingesetzten
Primerpaaren, die zur Amplifikation von Teilsequenzen der verschiedenen Denitrifikations-Gene
verwendet wurden (1: PSNosZ175F/1144R; 2: nosZ661F/1773R; 3: nirK1F/5R; 4: nirS1F/6R).