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Material und Methoden 41
37°C für 24-72 Stunden inkubiert wurden. Gewachsene, unterschiedliche Kolonien der
verschiedenen Verdünnungsstufen wurden schließlich wieder auf frischen, sich
entsprechenden, geviertelten Platten ausgestrichen und abermals bei 37°C für 24-72 Stunden
bebrütet. Mit dem Wachstum von Bakterien-Kolonien auf den tellurithaltigen Nährmedien
wäre zudem ein weiteres Selektivitätskriterium zur Kultivierung des mit Pseudomonas
aeruginosa sehr nah verwandten Paederus-Endosymbionten gegeben.
Die Gram-Eigenschaften aller gewachsenen, vereinzelten Kolonien wurden zusätzlich,
unabhängig von der Gram-Selektivität der verschiedenen Medien, mit Hilfe des
Aminopeptidase-Tests (siehe 2.9.5) bestimmt. Zusätzlich wurde mit zwei weiteren Tests das
Vorhandensein bestimmter Enzyme überprüft (siehe 2.9.6 und 2.9.7). Alle mit den drei Test-
Sets positiv getesteten Bakterien-Kulturen wurden anschließend, wie alle anderen isolierten
Reinkulturen, mittels Diagnostischer-PCR (siehe 2.10.2.1) untersucht. Dabei wurden
sämtliche vereinzelten Kolonien, die nicht sofort untersucht werden konnten, mindestens
einmal die Woche auf frische, geviertelte Platten mit dem jeweils entsprechenden Medium
überimpft und bei 37°C inkubiert.
2.9.3 Ausstrichverfahren zur Isolierung von Bakterienkolonien
Die auf den verschiedenen Medien gewachsenen Kolonien, die sich in Farbe, Struktur und
Morphologie unterschieden und somit für eine Vereinzelung geeignet waren, wurden mit
Hilfe des Verdünnungsausstrichs isoliert. Dabei wurde eine kleine Menge an Zellmaterial mit
einer sterilen Platinimpföse von den Mischplatten isoliert und mit Hilfe des fraktionierten
Drei-Impfösen-Ausstrich-Verfahrens (Ausglühen der Impföse nach jeder Strichserie) auf die
verschiedenen Agar-Medien ausgestrichen. Im Idealfall gelangten spätestens bei den letzten
Strichen nur noch einzelne Zellen in genügend weiten Abständen auf die Agaroberfläche, die
bei der sich anschließenden Bebrütung zu isoliert liegenden Einzelkolonien heranwachsen
konnten. Somit wurde sichergestellt, dass alle Kolonien, die aus den unterschiedlichen
Verdünnungsstufen gewonnen werden konnten, für nachfolgende Untersuchungen in Form
von Reinkulturen zur Verfügung standen.
2.9.4 Bestimmung eines geeigneten Anreicherungsmediums
Um herauszufinden, welches der verwendeten Flüssigmedien am besten für eine selektive
Anreicherung des Endosymbionten geeignet wäre, wurden von jeder Verdünnungsstufe aller