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Material und Methoden 46
2.9.10 Kompartimentierung des weiblichen Geschlechtstrakts
Da der Paederus-Endosymbiont sich bei seiner Weitergabe an die Nachkommenschaft auf
und/oder in den Eiern befindet, wurde zusätzlich eine Kompartimentierung des kompletten
weiblichen Geschlechtstrakts (siehe Abb. 16) durchgeführt.
Ovarien
Genitalkammer
Ovariengang
rechte Anhangsdrüse
linke
Anhangsdrüse
Ausführgang
0,5 mm
Abb. 16: Herauspräparierter weiblicher Geschlechtsapparat von Paederus riparius.
Weiß gestrichelte Linien stellen die Schnittpunkte mit dem Skalpell dar.
Dies sollte Aufschluss über ein mögliches Vorhandensein des Endosymbionten in den
einzelnen Kompartimenten und dessen Organisation darin geben. Insgesamt wurden fünf
Geschlechtsapparate von Paederus riparius-Weibchen mit dem Skalpell in die folgenden vier
Kompartimente zerteilt: Ovarien und Ovariengang, linke Anhangsdrüse, rechte
Anhangsdrüse, Genitalkammer und Ausführgang. Sich entsprechende Teile wurden
schließlich in sterilen 1,5 ml-Eppendorf-Reaktionsgefäßen in 50 µl PCR-Wasser vereinigt,
mit einer Microfederschere möglichst fein zerschnitten und nach einer 5-minütigen
Ultraschallbehandlung auf einem Wirbelmischer gut durchmischt. Bis zu ihrer Untersuchung
mittels Diagnostischer-PCR (siehe 2.10.2.1) blieben die Proben bei -20°C eingefroren.
Von zehn zusätzlich herauspräparierten Geschlechtsapparaten wurden fünf vor ihrer
Kompartimentierung in einer 4%igen PFA-Lösung (siehe 2.10.7.4) für ca. 60 Minuten bei
4°C fixiert, um beim Schneiden mit dem Skalpell die In-Vivo-Organisation möglichst nicht
zu verändern. Die einzelnen Teile wurden anschließend auf Adhäsions-Glasobjektträgern
(SuperFrost Ultra Plus; Menzel, Deutschland) mit dem Fluoreszenzfarbstoff DAPI