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MATERIAL UND METHODEN<br />
Variante 2:<br />
Es wurden 50 µl TMB Plus-Lösung (Kem-En-Tec Diagnostics A/S, Dänemark) hinzugegeben<br />
und je nach Stärke der Farbreaktion 0,5-5 min inkubiert. Die Substratumsetzung wurde mit<br />
0,25 M Schwefelsäure gestoppt. Die Quantifizierung erfolgte am ELISA-Reader<br />
(SpektraMAX 190, Molecular Devices) bei 450 nm.<br />
Tab. 2: : Antikörper für ELISA und Konvertaseabbauversuch<br />
Aufgelistet wurden die verwendeten primären Antikörper mit den dazu passenden HRPgekoppelten<br />
Sekundärantikörpern<br />
Primärer<br />
Antikörper<br />
(Klonalität /<br />
Wirt)<br />
Spezifität<br />
Firma<br />
/Quelle<br />
Verdünnung<br />
des primären<br />
Antikörpers<br />
sekundärer<br />
Antikörper<br />
Verdünnung<br />
des<br />
sekundären<br />
Antikörpers<br />
Anti-C3c-HRP C3, C3c DAKO 1:1000<br />
Kaninchenanti-C3a<br />
(polyclonal)<br />
C3, C3a Comptech 1:1000 Schwein-<br />
anti-<br />
Kaninchen-<br />
HRP<br />
1:1000<br />
Ziege-anti-<br />
Faktor B,<br />
Comptech 1:4000 Kaninchen-<br />
1:2000<br />
Faktor B<br />
Ba, Bb<br />
anti-Ziege-<br />
HRP<br />
Kaninchen-<br />
β2GPI,<br />
Abd-<br />
1:1000 Schwein-<br />
1:1000<br />
anti-β2GPI<br />
β2GPI I-V,<br />
Serotech<br />
anti-<br />
(polyclonal)<br />
β2GPI I-<br />
IV,β2GPI<br />
Kaninchen-<br />
HRP<br />
IV-V<br />
Im Folgenden werden die in dieser Arbeit durchgeführten ELISA näher erklärt:<br />
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