Inaugural Dissertation - Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg

2.4. Hochauflösende Mikroskopiemethoden
hat und vom Spiegel M2 reflektiert wurde, von M1 zum Detektor (die Photozelle P.) reflektiert wird.
Nur das Licht, welches aus dem Fokus D kommt, gelangt durch die Austrittspupille B und wird von der
Photozelle P. detektiert. Hierdurch wird Licht, welches aus Regionen außerhalb des Fokus kommt, abgeblockt,
während es in konventioneller Mikroskopie nur verschmiert wird [SW78]. Diese Eigenschaft
der Tiefendiskiminierung ermöglicht es, durch eine schrittweise axiale Verschiebung und erneute Rasterung
der Probe einen Bildstapel aufzunehmen. Anhand dieses Bildstapels lässt sich eine 3-dimensionale
Aufnahme des Objektes rekonstruieren.
(a)
Abbildung 2.4.1.: (a) Skizze des optischen Weges im konfokalen Mikroskop mit epi-Beleuchtung
(nach [Min]). (b) Das Prinzip der Konfokalität erzeugt im Strahlengang eines konfokalen Laserraster-
Mikroskops (engl.: Confocal Laser-Scanning Microscope, CLSM) eine Tiefendiskriminierung (Bild von
Dr. Kapitza, Carl Zeiss, Oberkochen).
(b)
2.4.2. 4PI-Mikroskopie
Die 4PI-Mikroskopie ist eine Abbildungsmethode mit fokussierter Beleuchtung, bei der die Probe
abgerastert wird. Es werden bei der 4PI-Mikroskopie die Foki zweier gegenüberliegender Mikroskopobjektive
überlagert, wodurch der effektive Öffnungswinkel und somit die Numerische Apertur
(NA) des Systems erhöht wird. Eine fundierte Beschreibung dieser Mikroskopietechnik findet sich u.a.
in [HS92b], [HS92a] und [HLCS94]. Der im Jahr 1994 in [HSLC94] beschriebene Versuchsaufbau ist
in Abb. 2.4.2 abgebildet. Hierbei handelte es sich um ein 4Pi-Mikroskop Typ B.
Tabelle 2.4.1.: Unterschiede zwischen den drei 4Pi-Varianten.
Anregung Detektion
4Pi Typ A kohärent konfokal
4Pi Typ B konfokal kohärent
4Pi Typ C kohärent kohärent
Man unterscheidet beim 4PI-Mikroskop zwischen Typ A, B und C je nachdem, ob die Anregung
und/oder die Detektion kohärent ist. Eine Zusammenstellung der Unterschiede findet sich in der
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