Inaugural Dissertation - Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg

4.1. Messungen an fluoreszenten Nanokugeln
Tabelle 4.1.1.: Vergleich der Höhen der Nebenmaxima in Prozent des Hauptmaximums von den 4Pi-
Aufnahmen in Abb.4.1.1. Am variablen Verhältnis von linkem zu rechtem Nebenmaximum erkennt man
den lateralen Phasenschub.
Y-Ebene Linkes Neben- Rechtes Neben- Verhältnis Linkes/Rechtes
maximum (%) maximum (%) Nebenmaximum
8 54 35 1,5
12 45 38 1,2
16 36 51 0,7
(a)
(b)
Abbildung 4.1.2.: (a) Mit einem Blurfilter bearbeitetes 4Pi-Bild eines 100nm grün fluoreszierenden
Beads; aufgenommen mit Ölobjektiven. (b) Intensitätsprofil in z-Richtung APD-Detektion (100x Öl korr.
Objektive, NA 1,46, 488nm Anregung).
allerdings nur für ein bestimmtes Phasenverhältnis vornehmen. Auch bei diesen Messungen zeigt sich
ein lateraler Phasenschub an dem sich mit der lateralen Position ändernden Verhältnis der Nebenmaxima.
Die hohen Nebenmaxima und die nicht ganz auf das Hintergrundniveau runter gehenden Minima sorgen
für Artefakte bei der Entfaltung der 4Pi-Bilder (Abbildung 4.1.3 rechts). Mithilfe einer Distanzmessung
zwischen den beiden Hauptmaxima der Beadkanten an einem 4Pi-Bild vor der Entfaltung konnte der
axiale Durchmesser des 6µm-Beads bis auf dreihundert Nanometer genau bestimmt werden.
Ein weiteres Problem der Justage der Phasenkompensation ist die Tatsache, dass es aufgrund von lokalen
Änderungen des Brechungsindexes erforderlich ist, die Korrektur in der ROI (engl.: Region Of Interest)
selbst vorzunehmen. Dies führt zu einem schlechteren Signal-Rausch-Verhältnis der eigentlichen
Aufnahme. Zudem erfordert es Strukturen der biologischen Probe, die eine im Vergleich zur Punktbildfunktion
geringe axiale Ausdehnung haben und zugleich hell genug sind. Diese Bedingung wird nicht
von allen biologischen Proben erfüllt, wie im nächsten Kapitel (4.3) anhand eines Beispiels gezeigt wird.
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