Inaugural Dissertation - Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg

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2. Physikalische Grundlagen aufgeleuchteten Fluoreszenzmoleküle, z.B. durch Anpassung von Gaussfunktionen an die einzelnen Fluoreszenzsignale und Bestimmung der Maximapositionen. Die Koordinaten der in allen Einzelbildern gefundenen Molekülpositionen werden zusammen mit einer Abschätzung der Photonenzahl und den Fehlern der lateralen Positionsbestimmung in einer Matrix gespeichert (bei dem von uns verwendeten SPDM-Algorithmus ist das die sogenannte Orte-Datei). Die Kenntnis über die Molekülpositionen ermöglicht anschließend die Durchführung unterschiedlicher Bildgebungsverfahren wie Verwischung der Molekülpositionen mit der Lokalisationsgenauigkeit oder dem Abstand zum benachbarten Molekül sowie die Darstellung durch Triangulation [BCS10]. Zudem lassen sich an den Einzelmoleküldaten verschiedene statistische Analysen durchführen. So können zum Beispiel die Verteilungen der Lokalisationsgenauigkeiten, die Distanzen aller Moleküle oder die Distanzen zu den benachbarten Molekülen untersucht, sowie die Anhäufung (engl.: cluster) von Einzelmolekülen analysiert werden. Derartige statistische Analysen sind mit anderen hochauflösenden Mikroskopiemethoden aufgrund der fehlenden Einzelmoleküldaten nicht durchführbar. In dieser Arbeit werden die Begriffe Lokalisationsmikroskopie und SPDM als Synonyme verwendet. 22
23 Abbildung 2.4.11.: Der Prozess der Lokalisationsmikroskopie von der Datenaufnahme bis hin zur Datenanalyse. (Teilweise aus [KLG + 09a]). 2.4. Hochauflösende Mikroskopiemethoden
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