GP-Skript für WS 2013/2014 (pdf) - in der Biochemie
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Versuch: Nukle<strong>in</strong>säuren I- Genetischer F<strong>in</strong>gerpr<strong>in</strong>t -<br />
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1. Isolierung <strong>der</strong> DNA<br />
1. Versuchstag<br />
Material:<br />
Wattestäbchen mit Mundschleimhautabstrich<br />
Puffer LPT mit Protease (Lysepuffer)<br />
Ethanol (96-100%)<br />
Puffer BP (B<strong>in</strong>depuffer)<br />
Puffer WP (Waschpuffer, auswaschen von Prote<strong>in</strong>en und unspezifisch gebundenen<br />
Stoffen)<br />
Peqlab Sp<strong>in</strong> Säule zur DNA-Aufre<strong>in</strong>igung und Auffangröhrchen<br />
Wasserbad (50°C)<br />
Wasserbad (70°C)<br />
Sterile gelbe und blaue Spitzen (bitte immer e<strong>in</strong>e neue sterile Spitze verwenden)<br />
sterile 1,5 und 2,0 ml Eppis<br />
Schere (mit Ethanol säubern)<br />
ACHTUNG! BEI GENTECHNISCHEN ARBEITEN MÜSSEN ALLE ABFÄLLE GESAMMELT<br />
(PLASTIKBEUTEL) UND VERNICHTET WERDEN!<br />
Durchführung:<br />
BITTE ZUERST LESEN UND DANN ARBEITEN ODER FRAGEN<br />
BITTE ALLE DURCHGEFÜHRTEN SCHRITTE ABHAKEN! <br />
‣ Ihr bekommt e<strong>in</strong> Eppi ausgeteilt, <strong>in</strong> dem sich 400µl LPT-Puffer und 20µl Protease<br />
bef<strong>in</strong>den, bitte zuerst mit eurem Namen beschriften (auf Deckel)<br />
‣ Ethanol (aus <strong>der</strong> grünen Spritzflasche) auf Kleenex geben und damit die Kl<strong>in</strong>gen<br />
<strong>der</strong> Schere abwischen<br />
‣ Anschließend mit Handschuhen das Wattestäbchen aus dem sterilen<br />
Gre<strong>in</strong>erröhrchen nehmen und ca. 5-10x rechts und l<strong>in</strong>ks im Mund über die Backe<br />
rubbeln<br />
‣ Das Wattestäbchen mit dem Mundschleimhautabstrich <strong>in</strong> das im Eppistän<strong>der</strong><br />
stehende Eppi mit dem LP-Puffer halten und <strong>der</strong> Stiel ca. 1cm über dem Watteteil<br />
mit <strong>der</strong> Schere abschneiden, und zwar so, dass <strong>der</strong> Wattebausch <strong>in</strong> die Flüssigkeit<br />
fällt und man das Eppi zumachen kann<br />
‣ 15 m<strong>in</strong>. bei 50°C (Temperaturoptimum <strong>der</strong> Prote<strong>in</strong>ase) im Wasserbad <strong>in</strong>kubieren,<br />
alle 5m<strong>in</strong> kurz vortexen<br />
‣ Mit <strong>der</strong> Hand (Handschuhe anziehen!)) e<strong>in</strong>e sterile gelbe Pipettenspitze (ohne<br />
Pipette) aus dem Pipettenspitzenkästchen nehmen, die Pipettenspitze <strong>in</strong> den<br />
hohlen Stiel des Wattestäbchens stecken (bitte fest re<strong>in</strong>drücken), Pipettenspitze<br />
mit dem Wattestächen vorsichtig an <strong>der</strong> Seite des Eppis ausdrücken und<br />
abstreichen, so dass möglichst viel Flüssigkeit, die eure DNA enthält, im Eppi<br />
bleibt!<br />
(Man kann die Wattestäbchen am besten handhaben, <strong>in</strong>dem man e<strong>in</strong>e sterile<br />
gelbe Pipettenspitze <strong>in</strong> den Rest des hohlen Plastikstäbchens steckt. (Achtung<br />
Sterilität)<br />
‣ danach Spitze mit Wattestäbchen wegwerfen<br />
‣ 200 µl BP-Puffer (B<strong>in</strong>de-Puffer) zu eurer DNA-Lösung zugeben, vortexen zum<br />
Mischen,<br />
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