Ossäre Regeneration eines experimentellen critical-size Defektes ...

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H‐FOBs transfiziert und jeweils als Zellkulturen von 1x10 6 mit dem MX10 des Er‐
satzmaterials in die critical‐size Defekte der Studie eingebracht.
Den Nachweis für eine erfolgreiche Transfektionspersistenz der durch lokalen Gen‐
transfer replikationsdefizienten Osteoblasten liefert ein V5‐tag Marker, eine Amino‐
säuresequenz am C‐terminalen Ende des exprimierten Proteins, der unter Verwen‐
dung eines Expressionsvektors (pcDNA3.1/nV5‐Dest Gateway) der Firma Invitro‐
gen (Invitrogen GmbH, Karlsruhe, Deutschland) in die Ostoblasten‐DNA einge‐
bracht wurde. Auf diese Weise exprimieren die transfizierten Osteoblasten das BMP‐
2 gemeinsam mit dem artifiziellen V5‐Fusionsprotein, welches einen immunhisto‐
chemischen Nachweis der mit dem Ersatzmaterial eingebrachten Zellen ermöglicht.
Der V5‐tag Antikörper besteht aus monoklonalen IgG 2a Immunglobulinen. Diese
binden nur an rekombinante Proteine, die für eine bessere Nachweisbarkeit mit dem
V5‐Epitop markiert sind. Der Antikörper erkennt am V5‐tag eine charakteristische
Sequenz aus folgenden Aminosäuren (Abb. 3.4.1):
V5 wurde erstmals im P‐ und V‐Protein des Paramyxvirus SV5 nachgewiesen [85]
und eignet sich sowohl für immunhistochemische Nachweismethoden, als auch für
ELISA‐ (enzyme‐linked immunosorbent assay) und Western‐Blot‐Analysen [3;35].
3.4.2 Rekombinantes PDGF
Abb. 3.4.1: Aminosäuren-Abfolge des V5-Epitops
Für eine Osteoinduktivität des alloplastischen Knochenersatzmaterials wurde in der
vorliegenden Studie als weiterer Lösungsansatz die Verwendung von rekombinan‐
tem PDGF (P4056‐50UG, Sigma Aldrich Chemie GmbH, Schnelldorf, Deutschland)
untersucht, welches in E.coli‐Kulturen exprimiert und mit dem MX10 der Ersatz‐
materials kombiniert wurde. PDGF wird unter anderem von Thrombozyten,