Isolierung und Charakterisierung von Bakterien aus ...

Nährstoffarme Medien
M4, (Mincer et al., 2002)
2 g Chitin
18 g Agar
ad 1 L Nordseewasser (30 PSU)
pH 7,5
Material und Methoden
Haferflockenmehl Medium, modifiziert nach Küster (Küster, 1959)
20 g Haferflockenmehl
15 g Agar
3 ml Spurenelementlösung
ad 1 L Ostseewasser (10 PSU)
pH 7,2
HW 0,01%, (Muscholl-Silberhorn et al., 2008)
0,1 g Hefe-Extrakt
15 g Agar
ad 1 L Nordseewasser (30 PSU)
pH 7,6
V.2.2 Kultivierung und Konservierung der Bakterien Stämme
Die auf den Medien gewachsenen Bakterienkulturen wurden mehrfach auf frischen Plat-
ten vereinzelt, bis eine Reinkultur vorlag. Diese wurde durch eine optische Kontrolle
überprüft. Von solchen Reinkulturen wurde die DNA mittels des Precellys Kits isoliert.
Durch eine 16S rDNA Gen Sequenzierung wurde auch molekularbiologisch überprüft,
ob eine Reinkultur vorlag und die Identifizierung der Reinkulturen mittels Blastn
(Altschul et al., 1990) durchgeführt. Erst danach wurde von jeder Kultur eine Rückstell-
probe angelegt. Alle identifizierten Isolate wurden mit dem Cryobanksystem von
MastDiagnostics in flüssigem Stickstoff (-80 °C) eingefroren und in der Stammdaten-
bank der Abteilung Marine Mikrobiologie hinterlegt.
Eine Übersicht über die weiteren Arbeiten, die mit den Bakterien erfolgten, ist in
Abbildung 5 zu sehen. Nachdem die isolierten Bakterien identifiziert waren wurden sie
in einem PCR-basierten Screening auf Sekundärmetabolit-Gencluster hin untersucht. In
den darauffolgenden Aktivitätstests wurden die Rohextrakte der Isolate gegen ein Panel
von Mikroorganismen getestet. Vielversprechende Extrakte wurden einer chemischen
Analyse unterzogen, um Informationen über die produzierten Metabolite zu erhalten.
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