Isolierung und Charakterisierung von Bakterien aus ...

Material und Methoden
Die Zellen wurden zuerst abzentrifugiert und das Frischgewicht bestimmt. Das Zellpel-
let wurde mit 100 % Methanol versetzt, mit dem Ultra Turax homogenisiert und unter
gelegentlichem Schütteln für 2 h bei 22 °C stehen gelassen. So wurde gewährleistet,
dass möglichst viele Metabolite aus den Zellen in das Lösungsmittel Methanol überge-
hen. Danach wurde die Suspension bei 10000 rpm für 13 min abzentrifugiert und der
Überstand durch einen Faltenfilter filtriert. Der Extrakt wurde in einen vorher leer ge-
wogenen Rundkolben aufgefangen und mit dem Rotationsverdampfer einrotiert. Nach
dem vollständigen Entfernen des Methanols wurde der Rundkolben erneut gewogen, um
die Menge des getrockneten Extraktes zu ermitteln. Dieser wurde in 5-10 ml 100 %
Methanol aufgenommen, im Ultraschallbad behandelt und die Suspension erneut zentri-
fugiert (10 min bei 10000 rpm), um sämtliche Zellbestandteile zu entfernen. Der Über-
stand wurde in einem kleinen Spitzkolben (das Leergewicht wurde vorher bestimmt)
einrotiert und der trockene Kolben erneut gewogen. Der trockene Extrakt wurde in 2 ml
100 % MeOH in einem Eppendorfgefäß aufgenommen und abzentrifugiert. In dem Ep-
pendorfgefäß blieb das Fett zurück, welches ebenfalls gewogen wurde und zur Berech-
nung des Gewichtes des Rohextraktes mit einbezogen wurde. Der Überstand wurde in
HPLC-Vials überführt und bis zur weiteren Analyse bei -20 °C gelagert.
V.5 Aktivitätstests
Um aus den 348 Bakterien-Isolaten die Auswahl einzugrenzen, wurden die Wirkungen
von 304 Rohextrakten gegen ausgewählte Testorganismen untersucht. Reinsubstanzen
wurden erweiterten Bioaktivitätstests wie den Enzymassay und den cytotoxischen Tes-
tungen unterzogen.
V.5.1 Antimikrobielle Aktivität
Die Bioaktivitätstests wurden nach Lang et al. 2007 modifiziert (Lang et al., 2007). In
den Tests wurde die Hemmung der Extrakte auf das Wachstum von verschiedenen Mik-
roorganismen getestet. Es wurden sowohl prokaryotische als auch eukaryotische Mik-
roorganismen in den Testsystemen verwendet:
Prokaryotische Testorganismen:
nicht-pathogene Mikroorganismen
Bacillus subtilis (DSM 347): Häufiges Gram-positives Bakterium.
Staphylococcus lentus (DSM 6672): Gram-positives Bakterium.
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