Aus dem Institut für Mikrobiologie, Zentrum für Infektionsmedizin

Material und Methoden
3.5 Präparation chromosomaler Streptokokken-DNA
DNA-Extraktion aus S. suis
Benötigte Reagenzien:
TEN-Puffer 50 mM Tris-HCL pH = 8; 1 mM EDTA,
SDS-Lösung 20%
100 mM NaCL
Lysozym 100 mg/ml
RNAse 10 mg/ml
Proteinase K-Lösung 20 mg/ml
CTAB-Lösung 10% in 0,7 M NaCl
NaCl-Lösung 4 M
Chloroform/Isoamylalkohol 24:1
Phenol/Chloroform/Isoamylalkohol 25:24:1
Isopropanol-Lösung 100%
Ethanol-Lösung 80%
Alle aufgeführten Chemikalien wurden von Roth (Karlsruhe) bezogen.
Durchführung:
Eine 10 ml THB-Übernachtkultur wurde bei 5000 g für 15 min abzentrifugiert. Nach dem
Verwerfen des Überstandes konnte das Sediment in 500 µl TEN-Puffer mit 10 mg/ml
Lysozym und 180 µg/ml RNAase resuspendiert werden. Die Suspension wurde bei 37°C für
1 h im Wasserbad inkubiert. Nach der Zugabe von 15 µl 20%iger SDS-Lösung und 10 µl
20 mg/ml Proteinase K-Lösung erfolgte nach wiederholtem Schwenken eine weitere
Inkubation bei 37°C für 1 h im Wasserbad. Anschließend wurden 125 ml 4 M NaCl und nach
vorsichtigem Mischen noch 80 µl einer auf 60°C erwärmten 10% CTAB-Lösung zugegeben.
Die Lösung wurde bei 65°C im Wasserbad für 10 min erwärmt. Durch die Zugabe von 780 µl
Chloroform/Isoamylalkohol (24:1) und wiederholtes Schwenken erfolgte die DNA-
Extraktion. Nach der Zentrifugation bei 10.000 g für 5 min wurde der Überstand ohne Anteile
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