Aus dem Institut für Mikrobiologie, Zentrum für Infektionsmedizin

Material und Methoden
3.9 MP-PCR von MAROIS et al. (2004) zum Direktnachweis von S. suis
und Serotyp 2-Stämmen
Zum Vergleich mit den Ergebnissen der Isolattypisierung mit der MP-PCR von SILVA et al.
(2004) konnte die von MAROIS et al. (2004) für den Direktnachweis beschriebene MP-PCR
für 39 Wildschweintonsillen erfolgreich eingesetzt werden. Im Gegensatz zur MP-PCR von
SILVA et al. (2004) generiert die MP-PCR von MAROIS et al. (2004) ein internes
Kontrollamplifikat für die cps2 Primer. Die Autoren setzen ebenso wie WISSELINK et al.
(1999) als „Template“ für die PCR nicht chromosomale DNA eines S. suis-Isolates ein,
sondern DNA aus Tonsillengewebe bzw. von Anreicherungskulturen. In der MP-PCR von
MAROIS et al. (2004) werden die Proben ausschließlich auf das Vorkommen von S. suis
sowie auf Serotyp 2 Stämme untersucht.
Wie von WISSELINK et al. (1999) beschrieben wurden mit Tonsillenstückchen 10 ml THB
mit 0,25% Streptococcus Selective Supplement (Oxoid) und 0,2 µg/ml Kristallviolett
inokkuliert und bei 37°C über Nacht inkubiert. Von der Mischkultur wurde wie unter 3.5
beschrieben chromosomale bakterielle DNA gewonnen. 100 ng dieser DNA wurden als
Matrize für die MP-PCR von MAROIS et al. (2004) eingesetzt. Die Durchführung dieser MP-
PCR erfolgte genau wie von den Autoren beschrieben. Für die Auswertung wurden nur die
Ergebnisse berücksichtigt, bei denen das Amplifikat der internen Kontrolle generiert wurde.
3.10 „Amplified Fragment Length Polymorphism” (AFLP)-Typisierung
Für die Typisierung der S. suis-Isolate konnte weiterhin die von REHM et al. (2004)
beschriebene und etablierte „Single Enzyme-AFLP“ eingesetzt werden. Die Autoren
modifizierten eine von GIBSON et al. (1998) für Helicobacter pylori beschriebene AFLP-
Typisierung. Die AFLP setzt sich aus drei aufeinanderfolgenden Reaktionen zusammen. Im
initialen Restriktionsverdau wurde die chromosomale DNA der S. suis-Isolate von
Wildschweinen (bzw. der Kontrollstämme) mit der Restriktionsendonuklease HindIII (New
England Biolabs, Frankfurt) geschnitten. Im Anschluß musste eine Ligation von
Oligonukleotid-Adaptern an die Schnittstellen durchgeführt werden. Die folgende PCR
generiert mit adapterspezifischen Primern spezifisch Amplifikationsprodukte
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