Verbesserte Fluoreszenz-in situ Hybridisierung (FISH ... - Mario Nenno

3.3.2. Charakterisierung der Phaseolin-Gen-tragenden Chromosomen
Pro Zellkern fanden sich nach der Hybridisierung immer ein bis zwei markierte,
einander sehr ähnliche Riesenchromosomen. Diese Chromosomen waren submeta-
zentrisch, gehörten weder zu den größten noch zu den kleinsten und zeigten auf
beiden Chromosomenarmen proximales (centromernahes) Heterochromatin. Am Ende
ihres kürzeren Armes hatten sie entweder einen kleinen Block oder mehrere kleine
Schollen von Heterochromatin. Zwischen diesem Heterochromatinblock bzw. -
schollen und dem Centromer befand sich immer ein aufgelockerter Bereich, in dem die
Markierung der Phaseolin-Sonde zu finden war. Interkalare Heterochromatinblöcke
waren weder am kürzeren noch am längeren Arm dieser Riesenchromosomen zu
erkennen. Manchmal waren auch am längeren Arm Heterochromatinblöcke bzw. -
schollen zu finden.
3.4 FISH mit rDNA-Sonde an mitotischen Chromosomen
Durch FISH mit der rDNA-Sonde (8.8kb Insert, pTA250) konnten die Gene für die
ribosomalen rRNA (18S, 5.8S und 25S rRNA) auf mitotischen Chromosomen
(Abbildung 18) aus dem Wurzelmeristem nachgewiesen werden. Dabei waren pro
Kern 5 bis 6 Signale zu erkennen (Abbildung 19). Die Präparate waren nicht mit
Pepsin vorbehandelt.
Abb. 18 - 19 : Mitotische Chromosomen aus dem Wurzelspitzenmeristem von Phaseolus coccineus
cv. Hammond's Dwarf Scarlet. Präparate ohne Pepsin/HCl-Vorbehandlung. Abb. 18: 22 Chromosomen
in der Metaphase. DAPI/Sulforhodamin Färbung. Die Chromosomen erscheinen weiß auf
rotem Hintergrund. Abb. 19: Sechs Signale (Pfeile) nach FISH mit rDNA-Sonde (8.8kb Insert,
pTA250). Die Chromosomen sind mit Propidiumiodid gegengefärbt. Maßstab 10µm.
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