Verbesserte Fluoreszenz-in situ Hybridisierung (FISH ... - Mario Nenno

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Abb. 20 - 21: FISH an Riesenchromosomen von Phaseolus coccineus cv. Hammond's Dwarf Scarlet mit rDNA-Sonde (8.8kb-Insert, pTA250) nach Pepsin/HCl-Vorbehandlung. FITC-dUTP als Detektionsystem. Die Markierungen lassen sich nicht in einzelne Signalpunkte auflösen. Gegenfärbung der Chromosomen mit Propidiumiodid. Abb. 20 : Markierungen auf einem Nucleolus und den NORs von zwei Chromosomen (Pfeile). Abb. 21: Markierungen an vier Chromosomen und einem abgerissenen Chromosomenfragment (Pfeile). Maßstab 25µm. 40
Tabelle 5: Verwendete Detektionssysteme. Avidin/Biotin-Systeme und Fluorescein(FITC)dUTP. ExtrAvidin/ ExtrAvidin/ Streptavidin/ FITC-dUTP FITC TRITC FITC verwendete rDNA rDNA rDNA rDNA Sonden Phaseolin Phaseolin Reporter- Biotin-dUTP Biotin-dUTP Biotin-dUTP dUTP Molekül Detektion ExtrAvidin ExtrAvidin Streptavidin - Fluoreszenz- FITC TRITC FITC FITC farbstoff (gelbgrün) (hellrot) (gelbgrün) (gelbgrün) Ergebnisse: einzelne meist ja meist ja meist ja nie Signalpunkte sichtbar ? Hintergrund- je nach Sonde gering im geringer als bei keine Signale unterschiedlich Vergleich zur ExtrAvidin-FITC stark Markierung 41
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