Verbesserte Fluoreszenz-in situ Hybridisierung (FISH ... - Mario Nenno

Signalpunkte darstellen, wurde bereits von mehreren Autoren beschrieben
(KALLIONIEMI et al., 1992; LEITCH et al., 1992).
Der Kondensationsgrad des Chromatins der NORs kann bei Phaseolus-Riesen-
chromosomen durch Umweltfaktoren oder Genaktivität beeinflußt sein. Es ist be-
kannt, daß Anzuchttemperaturen unter oder über dem Optimum (NAGL 1969a;1970a)
wie auch die in vitro Behandlung mit CaCl 2 (NAGL, 1970b) eine Kondensation der
Nucleolus organisierenden-Chromosomen bewirken können. Der Einfluß der
Genaktivität konnte durch Hemmung der RNA-Synthese mit Actinomycin D (NAGL,
1969b) nachgewiesen werden, was ebenfalls zur Kondensation der NO-Chromosomen
führte. Darüberhinaus wurde gezeigt, daß nur aufgelockerte NORs 3 H-Uridin
aufnehmen, was sie im kondensierten Zustand nicht taten (NAGL, 1969b). Der daraus
abgeleitete Zusammenhang, daß die Aktivität von Genen in kondensiertem Chromatin
in der Regel geringer ist als die in aufgelockertem, ist heute allgemein anerkannt.
Entsprechend spricht man bei Markierungen von rRNA-Genen auf aufgelockertem
Chromatin von aktiven Genen und solchen auf kondensiertem Chromatin von
inaktiven rRNA-Genen (GUSTAFSON et al., 1988; MUKAI et al., 1991; LEITCH et al.,
1992). Daß nicht alle NORs gleich kondensiert sind sondern einige aufgelockert,
andere dagegen kompakt, steht im Einklang mit den Ergebnissen von FREDIANI et al.
(1986), daß bei Phaseolus coccineus zu unterschiedlichen Zeitpunkten der
Embryonalentwicklung nur 2-4 der 6 NO-Chromosomen einer Suspensorzelle an der
Organisation des Nucleolus beteiligt sind.
Die Signale der rDNA-Sonde waren auf maximal 3 Chromosomenpaaren pro Kern zu
finden, die sich aufgrund ihrer Größe und Heterochromatinverteilung gemäß dem
modifizierten, vorläufigen Karyotyp nach SCHUMANN et al. (1990) als Chromosomen
Nr. 1, 5 und 11 einordnen ließen. Hinweise für Markierungen auf dem terminalen
Heterochromatin von Chromosom Nr. 2 (AVANZI et al., 1972) waren nicht zu
beobachten.
4.4 Lokalisation der Phaseolin-Gene
Phaseolin-Gene
Phaseolin ist ein Speicherprotein vom Typ der Viciline, das in den reifen Samen von
Phaseolus vulgaris als Hauptspeicherprotein etwa 50% der Gesamtproteine ausmacht
(OSBORN, 1988). Durch eindimensionale SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-
polyacrylamid gel electrophoresis) läßt es sich in drei Untereinheiten auftrennen, die
als α-, ß- und γ-Phaseolin bezeichnet werden. Die beiden α- und ß-Phaseolin-
Untereinheiten werden von zwei Gen-Familien kodiert, wobei die Gene für α-
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