Verbesserte Fluoreszenz-in situ Hybridisierung (FISH ... - Mario Nenno

3.5 Detektionsysteme
3.5.1. Avidin/Biotin-Detektions-Systeme
Das Standard-Detektionsystem für alle durchgeführten FISHs mit rDNA- und
Phaseolin-Sonden war Biotin/ExtrAvidin-FITC. Die Markierung dieses Detektions-
systems bestand meist aus Signalpunkten, die einzeln erkennbar waren. Nur bei
Markierungen von kompakten NORs (Abbildung 6) lagen die einzelnen Signalpunkte
so dicht nebeneinander, daß sie wie ein Fläche erschienen. Diese Art der Markierung
war bei allen drei verwendeten Avidin/Biotin-Detektions-Systemen (ExtrAvidin-
FITC/TRITC und Streptavidin/FITC), mit Ausnahme der Farbe, gleich. Nur die
Fluoreszenz war bei Streptavidin-FITC schwächer als im Vergleich bei ExtrAvidin-
FITC (vgl. Tabelle 5).
3.5.2. Fluorescein(FITC)-dUTP
Die Signale von Fluorescein(FITC)-dUTP unterschieden sich sehr deutlich von denen
der Avidin/Biotin-Detektionssysteme. Im Gegensatz zu den sich meist aus einzelnen
Signalpunkten zusammengesetzten Markierungen von ExtrAvidin-FITC/TRITC und
Streptavidin-FITC, waren die einzelnen Signalpunkte der FITC-dUTP-Markierung
nicht aufzulösen (Abbildungen 20 und 21)(vgl. Tabelle 5). Ein weiterer Unterschied
zu den Biotin/Avidin-Systemen waren die fehlenden Hintergrundsignale. Statt dessen
hatten die Präparate einen sehr schwachen, gelbgrüner Schimmer.
Beim mehrmaligen Durchmustern der Präparate fiel auf, daß die FITC-dUTP-
Markierungen durch das Anregungslicht sehr schnell ausblichen. Außerdem wurde
beobachtet, daß die Stärke der FITC-dUTP-Markierungen mit zunehmender
Lagerungsdauer immer weiter abnahm, d.h. je älter die Sonde war, desto schwächer
waren ihre Markierungen in der FISH.
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