Castanea sativa Miller - Ministerio de Agricultura, Alimentación y ...

tra que puede ser: micelio, una sección del
carpóforo o de la madera dañada, corte de
una hoja, etcétera; una vez en la placa se recubre
con agua destilada procurando empapar
bien el papel y mojando ligeramente la
muestra.
Después se debe vigilar cada 24 horas, debido
a que se facilita, no sólo el desarrollo
del hongo en cuestión, sino también el desarrollo
de gran variedad de saprofitos que
nos dificultan la observación.
b) Siembra en medio de cultivo artificial:
consiste en crear, no sólo una temperatura
y humedad propicia, sino también un alimento
artificial sustitutivo para poder vigilar
mejor el desarrollo del hongo.
Existen muchos medios de cultivo artificial,
sólo vamos a reseñar los utilizados en
este trabajo. Para lo cual vamos a citar las
fórmulas para la fabricación de estos cultivos:
Agar de patata glucosado
Echandi 1971 (PDA)
Patatas peladas y partidas 200 gr.
Dextrosa (glucosa) 20 gr.
Agar 17 gr.
Agua destilada 1.000 mi.
Medio Ponchet (P)
PONCHET et al, 1972
Este medio es selectivo para Phytophthora
spp.
Agua destilada 1.000 mi.
Agar 17 gr.
Malta 10 gr.
Penicilina G (400.000 VI) 2 cajas
Polymixina 75 % 0,25 gr.
PNCB 75 % 0,134 gr.
Benomilo 50 % 0,03 gr.
Agar malta
Medio para micoflora total de suelos.
Malta extrac 33 gr.
Agar técnica 10 gr.
H2O destilada 1 litro
Medio Komada
Es selectivo para Fusarium en suelo.
A. Agua destilada o desionizada
1.000 mi.
44
Asparagina 2 gr.
Fosfato bipotásico 1 gr.
Sulfato de Magnesio .. 0,5 gr.
Cloruro Potásico 0,5 gr.
Galactosa 10 gr.
Agar 20 gr.
B. Solución de Sulfato
ferroso
EDTA 37,5 gr.
SO4 Fe. 7H2O 27,85 gr.
Agua destilada 1.000 mi.
De esta solución se añaden 2 mi. a la formulación
indicada en A, deben prepararse
cantidades acordes, dado que no se puede
conservar.
Después, estos medios de cultivo se meten
en matraces y se esterilizan en el autoclave
durante un tiempo variable según el
medio.
Una vez tenemos el medio de cultivo, se
vierte en placas Petri con un dispensador automático
a razón de 20 ce. por placa y se disponen
sobre la bancada del laboratorio durante
24 horas para observar la existencia de
posibles contaminaciones de dichas placas
durante el proceso de elaboración del medio,
y se guarda envuelto en papel de aluminio
en cámara frigorífica hasta su utilización.
Debe anotarse el tipo de cultivo y la fecha
de elaboración del medio en las placas,
dado que algunos tienen un tiempo de caducidad.
El proceso de siembra debe ser lo suficientemente
rápido para evitar la infección del
cultivo. Debe realizarse cerca de una llama,
para poder desinfectar el instrumental: asa
de siembra, aguja enmangada o bisturí. Una
vez realizada la siembra las placas se sellan
con papel de parafilm para evitar desecación
y la contaminación del cultivo.
3. Existe una micoflora edáfica, muy importante
y de difícil aislamiento; para poder
estudiar estos hongos del suelo, utilizamos
materia orgánica de origen vegetal como
«trampa» en un medio líquido, para poder
captar las esporas flageladas de este tipo de
hongos. En nuestro caso hemos utilizado pétalos
de clavel y en raras ocasiones aguacate.
El método es el siguiente:
Primero hemos recogido tierra de la rizos-