Etude de différentes méthodes de biofonctionnalisation pour la ...

Conclusion générale
CONCLUSION GENERALE
Le travail présenté dans cette thése a consisté à étudier immobilisation de molécules biochimiques
(la Butyryicholinestérase dans notre cas) sur des transducteurs potentiométriques par différentes
méthodes d'immobilisation, afin de réaliser des microcapteurs potentiométriques de type ISFET (Ion
Sensible
Field Effect Transistor) la finalité étant la détection dun pesticide organophorsphoré (le
trichlorfon) dans l'eau.
Deux grands types d'immobilisation ont été mis au point:
- Immobilisation dans un film Langmuir-Blodgett
Immobilisation dans une membrane polymérique épaisse.
Dans le cadre du dépôt de monocouches enzymatiques, nous nous sommes attachés à caractériser la
présence des molécules d'enzyme (la BuChE) dans les films mixtes amphiphile/enzyme de Langmuir
¿ l'interface eaulair en fonction de la concentration de la solution d'enzyme, de la pression de surface,
du temps de relaxation du film, etc...
A partir de ces résultats,
une hypothèse sur l'évolutìon du film mixte amphiphile/ODA à l'interface
air/eau a été proposée. Nous supposons qu'il existe une réorganisation des molécules d'enzyme avec
les molécules de stéarylamine pour des pressions de surface comprises entre 35 mN/rn et 43 mN/rn.
Ce processus de réorganisation est contrôlé par le temps de relaxation du film. Cette hypothèse
semble être confirmée par spectroscopie FTIR-ATR et par AFM sur les films Langmuir-Blodgett
mixtes. Pour des pressions de surface de 30 mN/rn, les films mixtes transférés ne contiennent pas de
molécule d'amine, mais que des molécules d'enzyme; au contraire, pour les films mixtes transférés à
la pression de 40 mN/rn, les quantités de molécules d'enzyme et de stéarylamine deviennent plus
importantes et les films mixtes deviennent plus denses et homogènes. Nous avons donc choisi pour
élaborer des films enzymatiques par la technique Langmuir-Blodgett, une pression de transfert de 40
mN/rn, et un temps de relaxation du film d'environ 30 min.
Nous avons également effectué deux types de membranes enzymatiques épaisses afin de
réaliser
des microcapteurs potentiométriques (ENFET5). La première consiste en une procédure classique
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