Etude de différentes méthodes de biofonctionnalisation pour la ...

Il. Le transducteur et la biofonctionnalisation
III. La biofonctionnalisation par des membranes polymériques
111.1. Immobilisation de Ienzyme (BuChE) par co-réticulation avec Ialbumine de sérum bovin
(BSA)
Le glutaraldéhyde (GA) est le réactif homobifonctionnel le plus utilisé pour le couplage des
protéines. Il réagit avec les fonctions amines primaires et plus particulièrement avec les c amines de la
lysine des protéines. Donc, le glutaraldéhyde couramment employé en biochimie permet de réticuler
les protéines tout en conservant leur activité. Pour mieux comprendre les mécanismes de liaison
glutaraldéhyde-protéines, l'équipe de Monsan [26] a étudié les formes sous lesquelles peut se trouver
le glutaraldéhyde commercial en solution.
Dans notre travail, on effectue la réaction de réticulation des enzymes en présence de la
vapeur saturante de la solution de glutaraldéhyde (25%) (Merck). Le mécanisme réactionnel est
proposé par Richards et Knowles [27]:
CHO
2 CFK) - (CH2)3 - CIO CHO - (CH2)3 - C CH - (CH2)2 - CHO
Protéine
CHO - (CH2)3 - CH = C
(CH2)2 - CHO
CH = N - Protéine
H20
NH - Protéine
CI-IO - (CH2)3 - CH - CH - (CH2)2 - CHO
CHO
Ici, dans notre cas, on a réticulé d'enzyme BuChE avec une autre protéine, l'albumine de sérum
bovin (BSA). La composition de la membrane enzymatique est la suivante: 5% de
Butyrylcholinestérase, 5% de BSA, 10% de Glycérol, et 80% de
solution de tampon (1mM,
phosphate, pH8.0).
La présence de cette protéine permettant, par une meilleure répartition des
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