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Chiara Gianesello Coenzima Q 10 Lavoro di maturità in chimica________________________________________________________________________________________________Figura 10: HPLC Kontron in piena funzione5.1.2. Preparazione delle soluzioni standard e verifica dell’assorbanza UVL’analisi HPLC avviene tramite la misura dell’assorbimento di luce da parte di un detettore.Dallo spettro di assorbimento UV (sezione 1.3) si desume che l’assorbimento massimo delCoQ 10 avviene a 275 nm. Occorre quindi verificare la possibilità di produrre una retta dicalibrazione per un intervallo di concentrazioni applicabili poi nell’analisi HPLC.Sulla base della legge di Lambert e Beer e del coefficiente di estinzione molare 31 a 275 nm(ξ 275 = 14’200) 32 e allo spessore della cella l (1cm) si calcolano valori teorici di assorbanza(A) per diverse concentrazioni di CoQ 10 :A = c (mol/l) * ξ 275 * lSi preparano soluzioni corrispondenti dello standard di riferimento e si misura il valore diassorbanza verificandone la corrispondenza con il valore teorico.Le misure di assorbanza vengono effettuate con uno spettrofotometro UV-VIS KontronUVIKON 930 (Fig. 11).Quale standard di riferimento viene utilizzato un campione di CoQ 10 ottenuto da Sigma(Sigma C9538 “min. 98% (HPLC)”) per il quale è stato eseguito lo spettro infrarosso e lospettro ultravioletto (vedi Sezione 1.3).______________________________________________________________________________________Liceo Lugano 2, CH-6942 Savosa Pagina 14 di 53 dicembre 2005
Chiara Gianesello Coenzima Q 10 Lavoro di maturità in chimica________________________________________________________________________________________________Figura 11: spettrofotometro UV-VIS per la misura dell'assorbanza delle soluzioni di riferimentoLe soluzioni di riferimento vengono preparate sciogliendo in solvente organico masse distandard determinate con la bilancia analitica (0.1 mg). Quali solventi si scelgono:1) etanolo 332) miscela etanolo /isopropanolo/ metanolo (4/3.5/2.5) 34I valori di assorbanza delle diverse soluzioni vengono misurati in cuvette di quarzo con lospettrofotometro a doppio raggio contro solvente (parecchio tempo è stato perso causal’utilizzo di cuvette in vetro che assorbono intensamente nell’ultravioletto falsandocompletamente i dati!).Misura dell’assorbanza a λ = 275 nmSolvente etanoloIl valore di assorbanza calcolato e quello misurato per tre soluzioni a diversaconcentrazione sono riportati in tabella.Calcolo dell’assorbanza teorica:A = ξ 275 * c * l = 14’200 * c * 1 cmSoluzione C c (mol/l) A teorica A misurata(mg/ml)1 0.022 2,55*10 -5 0.3624 0.34142 0.021 2,43*10 -5 0.3459 0.38213 0.042 4,87*10 -5 0.6918 0.6426Tabella 1: valori di assorbanza teorica e sperimentale con soluzioni di CoQ 10 in etanolo______________________________________________________________________________________Liceo Lugano 2, CH-6942 Savosa Pagina 15 di 53 dicembre 2005
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