Aprendendo com as agrobacterias - Biotecnologia

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Figura 2 – Efeito do pH e da temperatura na produção de 4’gal-lactose, utilizando 6U/mL de β-galactosidase Figura 3 – Efeito da temperatura e da concentração de β-galactosidase na produção de 4’gal-lactose em pH 6,0 Tabela 3 – Efeito da concentração da enzima, pH e temperatura na síntese de galactooligossacarídeos Efeitos E rro puro t(2) Média 19,37 4 0,05 6 340,40 7 0,00000 9 ( 1) Enzima (L) - 0,99 0 0,13 3 -7,41 6 0,01769 7 ( 2) pH (L) 1,69 5 0,13 3 12,69 8 0,00614 4 (3) Temperatura (L) -1,290 0,13 3 - 9,66 4 0,01053 8 ( 1) e (2) 0,90 0 0,13 3 6,74 2 0,02129 6 ( 1) e (3) -0,66 5 0,13 3 -4,98 2 0,03800 7 ( 2) e (3) 0,58 0 0,13 3 4,34 5 0,04909 5 p completo 2 3 , os níveis de estudo estão apresentados na tabela 1. Foram analisadas as variáveis independentes: pH, temperatura e concentração de enzima, e a variável dependente: síntese do galactoligossacarídeo 4’galactosil-lactose (Figura 1). Após 24 horas o experimento foi interrompido pela inativação da enzima em banho fervente por 10 minutos e os produtos foram analisados por cromatografia líquida de alta eficiência (cromatógrafo Waters) com coluna Supelcogel TM Ca (300x7,8mm), tendo como fase móvel a água com fluxo de 0,5 mL/min a 80ºC e detectados por índice de refração. A análise estatística dos resultados foi realizada através do software STATISTICA utilizando Experimental design. 3. Resultados e discussão Os resultados da análise correspondentes ao planejamento fatorial de dois níveis são apresentados na tabela 2, toda a análise foi realizada com os valores das variáveis dependentes codificados. A resposta considerada foi a porcentagem de área do galactooligossacarídeo 4’galactosil-lactose (4’gal-lactose). As variáveis pH, temperatura e concentração de enzima e suas interações foram significativas a nível de 10%. Conforme demonstrado na tabela 3, o efeito da concentração de enzima, do nível –1 para +1, foi negativo, indicando que 4U/mL (-1) de enzima apresentou melhor produção de 4’gallactose do que 8U/mL (+1), o que pode ser comprovado analisando as figuras 3 e 4, onde se observa a tendência de aumentar a síntese de galactooligossacarídeos com a diminuição da concentração de enzima. O efeito do pH, quando houve aumento do nível –1 para +1, foi positivo, assim na faixa estudada o valor de pH 7,0 foi melhor, para a síntese do galactooligossacarídeo, que o valor de pH 5,0, havendo uma tendência de se trabalhar com valores de pH menos ácidos (figuras 2 e 4). Quando analisada a variação da temperatura o efeito foi negativo indicando que a temperatura no nível 12 Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento n.32 - janeiro/junho 2004
Tabela 4 - Análise de variância (ANOVA) para formação de 4’gal-lactose Soma quadrática Graus de liberdade mais baixo (35ºC) foi mais adequada para o sistema, e em temperaturas mais altas a tendência é diminuir a produção de 4’gal-lactose (figuras 2 e 3).O modelo matemático obtido através da análise estatística é apresentado na equação abaixo com R 2 = 0,9838, onde x 1 = enzima, x 2 = pH e x 3 = temperatura: Conforme a tabela 4, a análise de variância demonstra que o modelo é preditivo e estatisticamente significativo com a relação Fcal/Ftab de 41,19; p
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