alta de genes fazem com que oseqüenciamento do DNA total seja umaopção viável. Esta estratégia foi a abordagempioneira utilizada ao redor dosanos 70, e permitiu a conclusão deprojetos extremamente ambiciosos quepermitiram a construção de um quadrodetalhado da "anatomia molecular" devários microrganismos. O recorde destesprojetos foi atingido em 1996 com oseqüenciamento completo dos mais de12 milhões de pares de bases do genomada levedura (Saccharomyces cerevisae),resultado de um esforço conjunto decerca de 600 pesquisadores da Europa,Japão e Estados Unidos. Nos PG deparasitas esta estratégia está em andamentopara o Plasmodium falciparum(um dos agentes causadores da maláriahumana) e para Leishmania major (causadorda leishmaniose tegumentar). Embancos de dados específicos, no caso deP.falciparum, já se encontram disponíveis21.807 seqüências, todas derivadasdo cromossomo 2 (www.tigr.org/), e tambémseqüências dos cromossomos 1, 3 e4 (www.sanger.ac.uk). Dados gerais sobreo PG de Leishmania podem serencontrados em www.dbbm.fiocruz.br/genome/LGN/leishseq.html, e informaçõessobre outros PG de parasitas podemser obtidas emwww.dbbm.fiocruz.br/genome/genome.html e www.ebi.ac.uk/parasites/parasite-genome.html.Diante do imenso tamanho dosgenomas de certos organismos, foi adotadauma segunda estratégia, que priorizao seqüenciamento apenas da fração doDNA total (5 a 10%) que codifica osgenes. Esta estratégia é baseada noseqüenciamento de poucas centenas depares de bases de genes expressos contidosem bibliotecas de cDNA. Estasbibliotecas são basicamente coleções degenes expressos inseridos em vetoresartificiais de DNA que permitem o seuseqüenciamento. Os fragmentos de seqüênciasobtidos são denominados "etiquetasde seqüências expressas" ou EST(denominação empregada no dbEST),uma ferramenta extremamente útil nabusca de similaridades, identificação edescoberta de genes. Esta abordagemoferece a maneira mais rápida de obtençãode seqüências geneespecíficas deum grande número de moléculas decDNA, sendo atualmente a estratégia maisutilizada nos PG de parasitas. Atualmente,mais de 1 milhão de ESTs, de 80diferentes espécies, se encontram disponíveisnos bancos de dados(www.ncbi.nlm.nih.gov/dbEST/index.html), e, em média, cerca de 1.000novas seqüências são depositadas diariamente.A conclusão dos Projetos Genomaapenas será alcançada com oseqüenciamento de todos os genes expressos.O advento dos seqüenciadoresautomáticos de DNA representou umgrande avanço neste sentido, permitindoum aumento da produtividade para cercade 150.000 bases/pessoa/ano a umcusto final ao redor de US$ 1,00/base. Noentanto, para que todos os genes expressossejam seqüenciados, torna-se necessárioo desenvolvimento de protocolosque permitam contornar as limitaçõesdas atuais metodologias, como o repetidoseqüenciamento de genes altamenteexpressos, a dificuldade de obtenção deESTs de genes raros ou a freqüentepresença de artefatos de técnica quejuntos podem atingir níveis acima de60% das ESTs, conforme a bibliotecausada. Tais protocolos vêm sendo desenvolvidos,inclusive por laboratóriosbrasileiros envolvidos em PG de parasitas,e imediatamente oferecidos à comunidadecientífica internacional.UMA INICIATIVA BRASILEIRA: O20 <strong>Biotecnologia</strong> Ciência & Desenvolvimento
PROJETO GENOMA DESCHISTOSOMA MANSONIA primeira iniciativa de um PG noBrasil envolveu o seqüenciamento dosgenes expressos pelo parasita causadorda esquistossomose no Brasil, oSchistosoma mansoni. O projeto foi iniciadoem 1992 pelos drs. Andrew Simpson(Fiocruz) e Sérgio Pena (UFMG), emcolaboração com o dr. J. Craig Venter, doInstitute for Genomic Research, nos EstadosUnidos. O projeto se iniciou com aconstrução de uma biblioteca de cDNAdeste parasita e a geração das primeirasESTs. Posteriormente, grupos de outrospaíses (Japão, Inglaterra, Egito, França eEstados Unidos) se uniram ao grupobrasileiro, trabalhando na construção debibliotecas de cDNA, geração de ESTs emapeamento utilizando cromossomosartificiais de leveduras. Todas as seqüênciasobtidas são depositadas embancos de dados públicos e se encontramdisponíveis a todos os interessados.Desde o início do projeto, já foramproduzidas mais de 2.500 ESTs que devemrepresentar fragmentos de aproximadamente10% dos genes deste parasita.Dentre os genes de interesse já descobertos,podemos ressaltar genes similaresa fatores de transcrição, proteínasreguladoras e enzimas. Um dos maioresobjetivos do PG de S.mansoni é encontrargenes que possam explicar a suasobrevivência por tantos anos no hospedeiro.Neste sentido, cabe ressaltar oencontro, por nosso grupo, de uma ESTsimilar a um receptor de lipoproteínas debaixa densidade (LDL), pela primeira vezencontrado neste parasita. Além de utilizareste receptor para a captação de LDLdo hospedeiro, fundamental para a suasobrevivência, trabalhos anteriores demonstraramque este LDL ligado ao receptorforma uma capa ao redor de 85%do parasita, permitindo o seu escape aosistema imune. Vários outros genes deinteresse já foram etiquetados pelos diversosgrupos do projeto, e maioresinformações podem ser encontradas nahome-page www.nhm.ac.uk/schisto/.Pode-se concluir que adisponibilização de tecnologias degenoma em nosso país representa umadas contribuições mais importantes daimplantação de PG no Brasil. A existênciade grupos brasileiros profundamenteenvolvidos com PG como os deSchistosoma mansoni, Trypansoma cruzie Leishmania é uma garantia da fixaçãoe domínio de tecnologias de ponta naárea da biotecnologia no cenário nacional,um aspecto de fundamental importânciapara que possamos usufruir dosbenefícios gerados pelos outros PG ealcançar uma independência científicotecnológicanesta área.<strong>Biotecnologia</strong> Ciência & Desenvolvimento 21