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Os oócitos são capturados por meio<br />
de uma aspiração folicular que<br />
pode ocorrer em animais vivos ou já<br />
abatidos. A maturação dos oócitos<br />
envolve uma série de transformações<br />
nucleares, citoplasmáticas e<br />
moleculares que tornam o gameta<br />
feminino apto a ser fecundado.<br />
1 - Preparação da placa de<br />
fecundação<br />
Em uma placa de Petri preparar gotas<br />
de 10 μL de meio de fecundação,<br />
recobrí-las com óleo mineral e<br />
equilibrar em estufa incubadora por<br />
duas horas, antes do início do período<br />
de fecundação.<br />
posição inclinada. Lembrar de retirar<br />
uma pequena amostra de sêmen para<br />
analisar a motilidade e vigor do sêmen<br />
antes da incubação em estufa.<br />
- Manter o tubo Falcon com o sêmen por<br />
1 hora em estufa incubadora nas mesmas<br />
condições da maturação.<br />
Vários laboratórios utilizam o sêmen<br />
congelado. Após descongelamento, é<br />
necessário selecionar espermatozoides<br />
vivos e aptos à fecundação.<br />
O potencial de adquirir a competência<br />
para fecundar é denominada<br />
capacitação espermática. Para isso,<br />
precisa ocorrer uma desestabilização<br />
da membrana plasmática dos<br />
espermatozoides pela remoção de<br />
algumas proteínas, sem modificações<br />
morfológicas, resultando em uma<br />
hiperativação espermática.<br />
Procedimentos para a<br />
fecundação<br />
O material Biotécnicas da Reprodução<br />
em Bovinos, da Embrapa, traz<br />
algumas orientações para a realização<br />
da fecundação in vitro (FIV).<br />
2 - Preparação do Sêmen<br />
Neste momento são empregados<br />
métodos de seleção espermática<br />
para o sucesso da fertilização. O<br />
Swim-up pode melhorar alguns dos<br />
parâmetros relacionados a estrutura<br />
da cromatina do espermatozoide.<br />
Confira o passo a passo do Swim-up:<br />
- Adicionar 1 mL de SPTL em um tubo<br />
de fundo cônico de 15 mL, tampar,<br />
sem vedar, a rosca dos tubos e manter<br />
em estufa incubadora para estabilizar o<br />
meio.<br />
- Descongelar a palheta de sêmen em<br />
banho-maria a 37 ºC por 30 segundos.<br />
Em seguida, verter o conteúdo da<br />
palheta cuidadosamente no fundo<br />
do tubo contendo SPTL e mantê-lo<br />
apoiado dentro de um becker em<br />
- Após 1 hora, remover o sobrenadante<br />
e transferí-lo para um novo tubo Falcon<br />
previamente aquecido.<br />
- Remover uma segunda amostra<br />
de sêmen para analisar motilidade<br />
e vigor.<br />
- Centrifugar o tubo Falcon com o<br />
sêmen por 8 minutos a 1.200 RPM<br />
em centrífuga sorológica.<br />
- Remover o sobrenadante e<br />
ressuspender o pellet com meio<br />
FERT-TALP (previamente equilibrado<br />
na incubadora) para um volume<br />
final de 100 μL.<br />
- Deixar o tubo na incubadora enquanto<br />
se processa a contagem espermática.<br />
<strong>Revista</strong> <strong>Analytica</strong> | Setembro 2022<br />
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