Revista Analytica Edição 120

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Artigo 3 Em seguida, deve ser realizada a técnica de Percoll. Este método proporciona maior recuperação de espermatozoides móveis e com mais qualidade. Estes são os procedimentos para realizar a preparação do Mini Percoll: - Preparar um tubo cônico com capacidade de 1,5 mL com gradiente de Percoll, pela adição de 250 μL de Percoll 90% e, sobre esta camada, depositar 250 μL de gradiente Percoll 45%, vagarosamente, de maneira que as duas camadas não se misturem. - Equilibrar a temperatura e atmosfera do gradiente de Percoll em incubadora por aproximadamente 1 hora antes do uso. - Após o descongelamento do sêmen, o conteúdo da palheta deve ser depositado sobre as camadas de Percoll previamente aquecidas (não deixar o sêmen se misturar com as camadas de Percoll). - Centrifugar o tubo em uma microcentrífuga a 8.000 RPM, por 7 minutos. Remover o sobrenadante, ressuspender o pellet com 1 mL de meio FERT e centrifugar novamente por 5 min, utilizando a força de 3.200 RPM. - Remover 60 μL do pellet formado e transferir para outro eppendorf. - Transferir 5 μL para eppendorf contendo 50 μL de meio FERT para análise de motilidade progressiva. Após os procedimentos para descongelamento, deve-se realizar a contagem espermática e ajuste da concentração do sêmen: - Diluir 5 μL da amostra do sêmen em 250 μL de água e homogeneizar bem. - Contar os espermatozóides em 5 retículos da câmara de Neubauer para se determinar o volume de meio FERT-TALP a ser adicionado. Fecundação in vitro Após ajuste da concentração espermática transferir, no máximo 20 oócitos por gota, adicionar volume espermático e completar com FERT para volume final de 50 a 100 μL, de acordo com o protocolo adotado no laboratório. - Antes de transferir os oócitos para gota de fecundação, lavar, ao menos duas vezes, em meio FERT previamente equilibrado e aquecido. - Incubar os oócitos juntamente com os espermatozóides por um período de 18 a 22 horas, nas mesmas condições de atmosfera, temperatura e umidade adotadas para a maturação in vitro. Desenvolvimento do embrião O período de desenvolvimento embrionário pré-implantação é marcado por importantes eventos, como clivagem, ativação do genoma embrionário, compactação dos blastômeros, diferenciação do trofoblasto e embrioblasto, formação e expansão da blastocele e rompimento da zona pelúcida. 20 Revista Analytica | Setembro 2022
Esses fenômenos podem ser afetados de muitas formas no cultivo in vitro, sendo o ponto crítico do desenvolvimento a ativação do genoma embrionário, que se dá por volta do estádio de 8-16 células. Desenvolvimento da PIVE no Brasil O Brasil é um país bastante competente no desenvolvimento dessas técnicas. Somente em 2014, o Brasil produziu 70,8% dos embriões de FIV no mundo. Daqui em diante, é importante buscar formas de minimizar as perdas embrionárias na pré-implantação uterina, pois apenas 50% dos embriões transferidos chegam até o final da gestação. Produtos relacionados Estereomicroscópio com zoom (lançamento) Micropipetas Placas de petri Ponteiras Câmaras Neubauer Fontes: http://cbra.org.br/portal/downloads/publicacoes/rbra/v43/n2/p156- 159%20(RB785).pdf https://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/bitstream/ doc/1015853/1/BiotecnicasparaProducaoem Bovinos.Documentos175.pdf https://www.revistaespacios.com/a18v39n16/a18v39n16p02.pdf https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/25076/8/ Influ%C3%AAnciaM%C3%A9todosSele%C3%A7%C3%A3o.pdf Complemento Normativo - Artigo 3 Referente ao artigo 3 Disponibilizado por Analytica em parceria com Arena Técnica COMO É REALIZADA A PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES? Fonte: Blog Kasvi ISO 6717 In vitro diagnostic medical devices — Single-use containers for the collection of specimens from humans other than blood Norma publicada em: 08/2021. / Status: Vigente. Classificação 1: Sistemas de teste de diagnóstico in vitro Classificação 2: Norma recomendada. Artigo: PIVE: Como é realizada a produção in vitro de embriões? Entidade: ISO. País de procedência/Região: Suiça. https://www.iso.org/standard/80907.html ISO 21151 In vitro diagnostic medical devices — Requirements for international harmonisation protocols establishing metrological traceability of values assigned to calibrators and human samples Norma publicada em: 05/2020. / Status: Vigente. Classificação 1: Sistemas de teste de diagnóstico in vitro Classificação 2: Norma recomendada. Artigo: PIVE: Como é realizada a produção in vitro de embriões? Entidade: ISO. País de procedência/Região: Suiça. https://www.iso.org/standard/69985.html NBR 16075 Diagnóstico de uso in vitro - Competência de laboratórios e organização de ensaio de avaliação da conformidade de produtos - Requisitos gerais Norma publicada em: 08/2012. / Status: Vigente. Classificação 1: Sistemas de ensaio para diagnóstico in vitro Classificação 2: Norma recomendada. Artigo: PIVE: Como é realizada a produção in vitro de embriões? Entidade: ABNT País de procedência/Região: Brasil https://www.abntcatalogo.com.br/norma.aspx?Q=T3hOR1dPTl RtR0xxS3grWkZ6WTNIeDdvN3ZpaVJvUnRYYm04U HRYaHM2ND0= DIN EN 13532 General requirements for in vitro diagnostic medical devices for self-testing Norma publicada em: 08/2002. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada. Artigo: PIVE: Como é realizada a produção in vitro de embriões? Entidade: ISO. País de procedência/Região: Alemanha https://www.beuth.de/en/standard/din-en-13532/44554238 DIN EN 13612 Performance evaluation of in vitro diagnostic medical devices Norma publicada em: 08/2002. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada. Artigo: PIVE: Como é realizada a produção in vitro de embriões? Entidade: ISO. País de procedência/Região: Alemanha https://www.beuth.de/en/standard/din-en-13612/44554207 Revista Analytica | Setembro 2022 21
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