2009-special b.vp

1. Ìóëäàøåâ A. A., Êó÷åðîâ C. E. Äðåâîâèäíûé ìîææåâåëüíèê //Òàáèãàò. —¹1(36). — 2005. — Ñ. 24 – 25.2. Davis B. J. Disc electrophoresis. 11. Methods and application tohuman serum proteins // Ann. New York Acad. Sci. — 1964. —V. 121. — P. 404 – 427.3. Merwe M. V., Winfield M. O., Arnold G. M. et al. Spatial and temporalaspects of the genetic structure of Juniperus communis populations// Mol. Ecol. — 2000. — V. 9. P. 379 – 386.4. Ornstein L. Disc-electrophoresis. I. Background and theory //Ann.New York Acad. Sci. — 1964. — V. 121. — P. 321 – 349. 1Èíñòèòóò áèîëîãèè Êàðåëüñêîãî íàó÷íîãî öåíòðà ÐÀÍ, topchiev@krc.karelia.ru2Èíñòèòóò ëåñà Êàðåëüñêîãî íàó÷íîãî öåíòðà ÐÀÍ, vetchin@krc.karelia.ru Íàáëþäàåìîå â ïîñëåäíèå 50 – 70 ëåò ñîêðàùåíèå÷èñëåííîñòè ïðèðîäíûõ ïîïóëÿöèé êàðåëüñêîé áåðåçûBetula pendula Roth var. carelica (Mercklin) Hämet-Ahti èèõ åñòåñòâåííîãî âîçîáíîâëåíèÿ ñòàâèò ïåðåä èññëåäîâàòåëÿìèâàæíóþ çàäà÷ó ïî ðàçðàáîòêå ñòðàòåãèè ñîõðàíåíèÿýòîãî öåííîãî âèäà äåðåâüåâ è åãî ðàöèîíàëüíîãîèñïîëüçîâàíèÿ.  ñèñòåìå ñîâðåìåííûõ îõðàííûõìåðîïðèÿòèé, êàê ðàñòåíèé, òàê è æèâîòíûõ íåîáõîäèìîó÷èòûâàòü ãåíåòè÷åñêóþ ñòðóêòóðó èõ ïîïóëÿöèé.Äëÿ èçó÷åíèÿ ãåíîôîíäîâ â ïîñëåäíåå âðåìÿ âñå÷àùå èñïîëüçóþò ðàçëè÷íûå ìîëåêóëÿðíî-ãåíåòè÷åñêèåìàðêåðû, òàêèå êàê ÐÀÏÄ è ìèêðîñàòåëëèòíûå ëîêóñû. íàñòîÿùåé ðàáîòå äëÿ îöåíêè óðîâíÿ ãåíåòè÷åñêîéèçìåí÷èâîñòè ïîïóëÿöèé êàðåëüñêîé áåðåçû ìûèñïîëüçîâàëè ìåæìèêðîñàòåëëèòíûå ìàðêåðû (ISSR),êîòîðûå ïðåäñòàâëåíû áîëüøèì ÷èñëîì ìèêðîñàòåëëèòíûõëîêóñîâ, ðàññåÿííûõ ïî âñåìó ãåíîìó. Ýòîò òèïìàðêåðîâ ðàíåå áûë óñïåøíî èñïîëüçîâàí ïðè èññëåäîâàíèÿõìåæ- è âíóòðèâèäîâîãî ïîëèìîðôèçìà ðàñòåíèé(Äàíèëîâà è äð., 2003).  ðàáîòå íàìè èñïîëüçîâàëèñü3 ïðàéìåðà íà îñíîâå äèíóêëåîòèäíûõ ïîâòîðîâ(ÀG) 9 C, (AC) 9 T, (AG) 8 TC.Îáúåêòàìè èññëåäîâàíèÿ ñëóæèëè 3 ïîïóëÿöèè êàðåëüñêîéáåðåçû, ðàñïîëîæåííûõ íà òåððèòîðèè ÐåñïóáëèêèÊàðåëèÿ: äâå ïîïóëÿöèè èç þæíîé ÷àñòè ÐåñïóáëèêèÊàðåëèÿ (Êàêêîðîâî-1, Êàêêîðîâî-2) è îäíà —èç ñåâåðíîé (Çàîíåæüå). Îáðàçöû äëÿ àíàëèçà îòáèðàëèñüñ 30 äåðåâüåâ â êàæäîé ïîïóëÿöèè. ÑóììàðíóþÄÍÊ âûäåëÿëè èç ëèñòüåâ CTAB-ìåòîäîì (Mollen, etal., 1992). ÄÍÊ îñàæäàëè èçîïðîïàíîëîì, âûñóøèâàëèè ðàñòâîðÿëè â ñòåðèëüíîé âîäå. Ðàñòâîð ÄÍÊ õðàíèëèïðè –25(Ñ. Ðåàêöèîííàÿ ñìåñü äëÿ ÏÖÐ îáúåìîì30 ìêë ñîäåðæàëà 50 íã ÄÍÊ èññëåäóåìûõ îáðàçöîâ,100 ïÌ ïðàéìåðà, 1 åä. Taq ïîëèìåðàçû (Ñèëåêñ),0,2 ìÌ dNTP, 2,5 ìêë 10õáóôåðà äëÿ Taq ïîëèìåðàçû,ñîãëàñíî èíñòðóêöèè ê íàáîðó äëÿ ÏÖÐ (Ñèëåêñ).ÏÖÐ îñóùåñòâëÿëè â àìïëèôèêàòîðå RoboCycler(Stratagene, ÑØÀ). Óñëîâèÿ ÏÖÐ: äåíàòóðàöèÿ — 1 ìèíïðè 94 (Ñ, îòæèã — 1 ìèí ïðè 52(Ñ, ïîëèìåðèçàöèÿ —1 ìèí ïðè 72(Ñ; êîëè÷åñòâî öèêëîâ — 35; äîñòðàèâàíèåôðàãìåíòîâ — 10 ìèí ïðè 72(Ñ. ÏÖÐ ïðîäóêòû ðàçäåëÿëèâ 6% ÏÀÀÃ, èñïîëüçóÿ Òðèñ-áîðàòíûé áóôåð.ÏÖÐ ïðîäóêòû îêðàøèâàëè ðàñòâîðîì áðîìèñòîãî ýòèäèÿè âèçóàëèçèðîâàëè â ïðîõîäÿùåì ÓÔ ñâåòå.ÏÖÐ-ôðàãìåíòû àíàëèçèðîâàëè ñ ïîìîùüþ ïðîãðàììûKodak 1D (Kodak, USA).Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî óêàçàííûåïðàéìåðû ãåíåðèðîâàëè ôðàãìåíòû ÄÍÊ ñ ìîëåêóëÿðíîéìàññîé îò 1300 äî 200 ï.î. (ðèñ.) Ñðåäíåå êîëè÷åñòâîàìïëèôèöèðîâàííûõ ôðàãìåíòîâ ÄÍÊ ñîñòàâèëî11.1, 13.8 è 9.6 äëÿ ïðàéìåðîâ (ÀG) 9 C, (AG) 8 TC,(AC) 9 T, ñîîòâåòñòâåííî. Êîëè÷åñòâî è äîëÿ ïîëèìîðôíûõëîêóñîâ âàðüèðîâàëà â çàâèñèìîñòè îò ïðàéìåðà.Íàèìåíüøåå èõ çíà÷åíèå ïîëó÷åíî äëÿ ìàðêåðà(AG) 8 TÑ (äîëÿ ïîëèìîðôíûõ ëîêóñîâ — 0,81), à íàèáîëüøååçíà÷åíèå ïîëó÷åíî äëÿ ìàðêåðà (ÀG) 9 C (0,92).Ñðåäíåå çíà÷åíèå îæèäàåìîé ãåòåðîçèãîòíîñòè (Íå) ïîISSR-ñïåêòðû ÄÍÊ êàðåëüñêîé áåðåçû. Ïîïóëÿöèÿ Êàêêîðîâî1. Ïðàéìåð (AG) 8 ÒÑ. 1 — ìàðêåð ìîëåêóëÿðíîé ìàññû 1000 ï.î.2–-9 — ÏÖÐ ôðàãìåíòû ÄÍÊ èç ðàçíûõ äåðåâüåâ144 Àãðàðíàÿ Ðîññèÿ. 2009. Ñïåöèàëüíûé âûïóñê