Echerichia coli kasvu heterogeensus ja toksiin-antitoksiini süsteemid

Joonis 12. ∆relBE LB söötmes kasvamahakkamine statsionaarsest faasist väljumisel jälgituna ühe raku tasemel GFPlahjenemise abil dotblotina: statsionaarse faasi ajapunktid 31 h ja 40 h. Statsionaarse kultuuri vanuse nullajapunktiksloetakse tema kasvamapanekut üleöökultuurist. GFP sünteesi induktori juuresolekul inkubeeriti rakke 37°C juures.Vastaval statsionaarse faasi ajapunktil eemaldati induktor ning rakud külvati värskesse söötmesse, mis oli ühtlasi kakasvamahakkamise uurimise nullajapunktiks. Rakkude jagunemise jälgimine toimus GFP lahjenemise järgi: midavähem rakud GFP-d sisaldavad, seda rohkem jagunemisi on nad peale GFP sünteesi induktori eemaldamist läbiteinud. J tähistab jagunevat populatsiooni ja MJ mittejagunevat.2.2.5. relBE ei mõjuta bakterite jagunemist peale aminohappenälga.Katsed näitavad, et relE toksiin aktiveeritkase vastusena aminohappe näljale (Christensen jt.,2001). Nendes tingimustes suureneb ka märgatavalt relBE operoni transkriptsioon. Katseeesmärgiks oli vaadelda üksikraku tasemel relBE TA süsteemi mõju kasvu heterogeensuseleaminohappenälja tingimustes ja aminohappenäljast väljumisel, kasutades selleks GFPlahjenemise meetodit (Roostalu jt., 2008).Katses indutseeriti 37°C juures kasvavates kultuurides GFP süntees. Peale induktori eemaldamisttekitati aminohappenälg, kas valiini või seriinhüdroksamaadiga (SHT). Valiin inhibeeribisoleutsiini sünteesi (Umbarger ja Brown, 1955). SHT lisamine söötmele põhjustab aminohappeseriin nälja. SHT käitub serüül-tRNA süntetaasi konkureeriva inhibiitorina ja takistab sellegaseriin-tRNA laadimist (Tosa ja Pizer, 1971). Mõlema aminohappenälja tekitamise viisi korralhakati proove koguma peale GFP sünteesi induktori eemaldamist.34