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Pos: 14 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Probenvorbereitung und Lagerung @ 1\mod_1200479893290_6.doc @ 12807 7.2 Probenvorbereitung und Lagerung Lipämische, hämolytische sowie ikterische Proben (Serum oder Plasma) sollten nur unter Vorbehalt eingesetzt werden, obwohl in unseren Untersuchungen kein negativer Einfluss bemerkt wurde. Bakteriell kontaminierte Proben sollten nicht verwendet werden. Geeignete Untersuchungsmaterialien sind Serum-, Plasma- (EDTA, Citrat, Heparin) oder Liquorproben, die nach Standardlabortechniken gewonnen werden. Pos: 15 /Multianalyt/Gültig für nur ein Dokument/Durchführung des Tests/Borrelia: Probenverdünnung IgG Test @ 2\mod_1219406023277_6.doc @ 15940 Die Proben dürfen nicht thermisch inaktiviert werden. 7.2.1 Probenverdünnung für IgG Test Vor Testbeginn die Proben (V1) in Verdünnungspuffer (V2) verdünnen: V1 + V2 = 1+200 je 5 µL Patientenserum zu je 1000 µL Verdünnungspuffer oder 10 µL Patientenserum zu 2000 µL Verdünnungspuffer Nach jeder Verdünnung und vor dem Pipettierschritt die Proben mit einem Monomixer (z.B. Vortex) gut durchmischen, um eine homogene Lösung herzustellen. Pos: 16 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Probenverdünnung IgM-Tests @ 0\mod_1182434692620_6.doc @ 1360 7.2.2 Probenverdünnung für IgM-Tests Rheumafaktor-Interferenz Rheumafaktor-Antikörper sind vorwiegend Autoantikörper der IgM-Klasse, die bevorzugt an IgG-Immunkomplexe binden. Der spezifische Nachweis von IgM-Antikörpern kann durch diese Rheumafaktoren zu falsch-positiven Ergebnissen führen. Ferner besteht die Möglichkeit, dass bindungsschwächere erregerspezifische IgM-Antikörper durch bindungsstärkere IgG-Antikörper verdrängt werden. Ein IgM-Nachweis kann dann falschnegativ ausfallen. Aus diesem Grund ist es erforderlich, die Proben für die IgM- Bestimmung mit Rheumafaktor-Absorbens vorzubehandeln (SERION-Rf-Absorbens). Zunächst erfolgt eine Verdünnung des Rheumafaktor-Absorbens (V3) mit Verdünnungspuffer (V4): V3 + V4 = 1+4 je 200 µL Rheumafaktor-Absorbens zu je 800 µL Verdünnungspuffer Die Proben (V5) werden im verdünnten Rheumafaktor-Absorbens (V6) wie folgt verdünnt: V5 + V6 = 1+100 je 10 µL Patientenserum zu je 1000 µL verdünntes Rheumafaktor-Absorbens Für die Rheumafaktor-Absorption die verdünnten Seren 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren lassen. deutsch 11
Pos: 17 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Probenlagerung @ 0\mod_1182434809419_6.doc @ 1375 Kontrollseren nicht mit Rheumafaktor-Absorbens behandeln! 7.2.3 Probenlagerung Patientenproben sollten nicht länger als 7 Tage bei 2-8°C aufbewahrt werden. Längere Lagerung der Proben ist bei ≤ -20°C möglich. Pos: 18 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Reagenzienvorbereitung @ 1\mod_1203500182443_6.doc @ 13349 Mehrmaliges Auftauen und Wiedereinfrieren vermeiden. Verdünnte Proben können bei 2-8°C eine Woche aufbewahrt werden. 7.3 Reagenzienvorbereitung 7.3.1 Beschichtete Partikel Die beschichteten Partikel sind in 4 Fläschchen als Lyophilisate im Kit bereitgestellt. Jedes Fläschchen muss mit 3 ml Testpuffer (TSOL) rekonstituiert werden und ist ausreichend für die Testdurchführung in 24 Kavitäten (3 Teststreifen). Nur so viele Fläschchen rekonstituieren, wie für die Testung benötigt werden. Nicht benötigte Fläschchen als Lyophilisate lagern. Die rekonstituierten Partikel sind vor dem Pipettieren vorsichtig zu resuspendieren. Dazu das Partikelfläschchen horizontal zwischen den Handflächen rollen. Schaumbildung vermeiden! Kontamination z. B. durch Verwendung eines Dispensers mit Pipettenspitze vermeiden. Vor jedem Eintauchen in das Partikelgefäß Spitze wechseln. Pos: 19 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Kontrollproben @ 2\mod_1219407835654_6.doc @ 15972 7.3.2 Kontrollproben Kontrollproben sind gebrauchsfertig und müssen nicht weiter verdünnt werden. Sie können direkt im Test eingesetzt werden. Bei jedem Testlauf muss unabhängig von der Anzahl der zu testenden Proben die Negativkontrolle (CO2) in Einfach-, das Standardserum (CO1) in Doppelbestimmung mitgeführt werden. Pos: 20 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Konjugat @ 1\mod_1203500587045_6.doc @ 13365 Kontrollseren nicht mit Rheumafaktor-Absorbens behandeln! 7.3.3 Anti-Human-IgG-, IgM- bzw. IgA-Fluoreszenzfarbstoff-Konjugat (gebrauchsfertig) Konjugate sind wie unter Kapitel 7.1 beschrieben austauschbar. Kontamination z. B. durch Verwendung eines Dispensers mit Pipettenspitze vermeiden. Vor jedem Eintauchen in das Konjugatgefäß Spitze wechseln. Pos: 21 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Waschlösung bis MTP @ 1\mod_1203502252747_6.doc @ 13381 deutsch 12
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