Gebrauchsanweisung - virion\serion
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Waschvorgang mit Zentrifuge<br />
Zum Waschen der V-Boden-Mikrotiterplatte wird eine Zentrifuge mit Mikrotiterplatteneinsatz<br />
verwendet (siehe Kapitel 5). Zum Pelletieren der Partikel wird die V-Boden-<br />
Mikrotiterplatte 3 Minuten bei 300 g zentrifugiert. Danach wird der Überstand verworfen<br />
(durch vorsichtiges Dekantieren) und die V-Boden-Mikrotiterplatte leicht ausgeklopft.<br />
Die angegebenen Parameter zur Durchführung der Zentrifugation sollten genau<br />
eingehalten werden. Zu langes bzw. zu festes Zentrifugieren führt zur<br />
Aggregation der Partikel. Zu kurzes bzw. zu schwaches Zentrifugieren führt zu<br />
einer unzureichenden Pelletierung und damit zu einem Partikelverlust.<br />
Ein vollständiger Waschzyklus setzt sich aus folgenden Schritten zusammen:<br />
a. V-Boden-Mikrotiterplatte in der Zentrifuge positionieren<br />
b. Pelletierung der Partikel durch Zentrifugation (3 Minuten bei 300 g)<br />
c. Überstand verwerfen (durch vorsichtiges Dekantieren) und V-Boden-Mikrotiterplatte<br />
leicht ausklopfen<br />
d. in jede Kavität 100 µl Waschlösung pipettieren<br />
e. Schritte a. bis d. 3 x wiederholen (also insgesamt 4 x waschen)<br />
Pos: 28 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Inkubation @ 0\mod_1182439690672_6.doc @ 1480<br />
7.5.3 Inkubation<br />
Schaumbildung vermeiden!<br />
Da Fluoreszenzfarbstoffe unter Einwirkung von UV-Licht ausbleichen (sog. „Photobleaching“-Effekt)<br />
und es dadurch zur Verringerung der Fluoreszenzintensitäten kommen<br />
kann, ist es notwendig die Inkubation im Dunkeln durchzuführen. Die Mikrotiterplatte ist<br />
dabei zusätzlich mit dem im Kit befindlichen Deckel abzudecken. Die verwendeten<br />
Kavitäten dürfen nicht abgeklebt werden.<br />
Pos: 29 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Messvorgang @ 2\mod_1219408725269_6.doc @ 16020<br />
7.5.4 Messvorgang<br />
In Abhängigkeit vom verwendeten Durchflusszytometer kann die Mikrotiterplatte direkt<br />
zugeführt werden, oder die Reaktionslösungen müssen zunächst in entsprechende<br />
Röhrchen pipettiert werden (hierbei auf die korrekte Beschriftung der Röhrchen achten!).<br />
Die Messung am Durchflusszytometer wird entsprechend den Herstellerangaben<br />
durchgeführt. Bei Röhrchenzufuhr-Durchflusszytometern ist es notwendig die Messungen<br />
der Proben aus der Mikrotiterplatte spaltenweise (A1–H1, A2–H2, …, A12–H12) nicht<br />
zeilenweise durchzuführen und die Dateinamen zu jeder Messung sorgfältig zu<br />
dokumentieren. Die Verwendung eines Pipettierplans ist dringend zu empfehlen. Als<br />
Messmethode muss die mit Hilfe des SERION Multianalyt Setup erstellte Messmethode<br />
ausgewählt werden. Nur so kann eine korrekte Parametrisierung des<br />
Durchflusszytometers gewährleistet werden.<br />
Der Messvorgang sollte innerhalb eines Tages nach Beendigung des letzten Waschzyklus<br />
begonnen werden.<br />
deutsch 19
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