Gebrauchsanweisung - virion\serion

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Waschvorgang mit Zentrifuge Zum Waschen der V-Boden-Mikrotiterplatte wird eine Zentrifuge mit Mikrotiterplatteneinsatz verwendet (siehe Kapitel 5). Zum Pelletieren der Partikel wird die V-Boden- Mikrotiterplatte 3 Minuten bei 300 g zentrifugiert. Danach wird der Überstand verworfen (durch vorsichtiges Dekantieren) und die V-Boden-Mikrotiterplatte leicht ausgeklopft. Die angegebenen Parameter zur Durchführung der Zentrifugation sollten genau eingehalten werden. Zu langes bzw. zu festes Zentrifugieren führt zur Aggregation der Partikel. Zu kurzes bzw. zu schwaches Zentrifugieren führt zu einer unzureichenden Pelletierung und damit zu einem Partikelverlust. Ein vollständiger Waschzyklus setzt sich aus folgenden Schritten zusammen: a. V-Boden-Mikrotiterplatte in der Zentrifuge positionieren b. Pelletierung der Partikel durch Zentrifugation (3 Minuten bei 300 g) c. Überstand verwerfen (durch vorsichtiges Dekantieren) und V-Boden-Mikrotiterplatte leicht ausklopfen d. in jede Kavität 100 µl Waschlösung pipettieren e. Schritte a. bis d. 3 x wiederholen (also insgesamt 4 x waschen) Pos: 28 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Inkubation @ 0\mod_1182439690672_6.doc @ 1480 7.5.3 Inkubation Schaumbildung vermeiden! Da Fluoreszenzfarbstoffe unter Einwirkung von UV-Licht ausbleichen (sog. „Photobleaching“-Effekt) und es dadurch zur Verringerung der Fluoreszenzintensitäten kommen kann, ist es notwendig die Inkubation im Dunkeln durchzuführen. Die Mikrotiterplatte ist dabei zusätzlich mit dem im Kit befindlichen Deckel abzudecken. Die verwendeten Kavitäten dürfen nicht abgeklebt werden. Pos: 29 /Multianalyt/Gültig für alle Dokumente/Durchführung des Tests/Messvorgang @ 2\mod_1219408725269_6.doc @ 16020 7.5.4 Messvorgang In Abhängigkeit vom verwendeten Durchflusszytometer kann die Mikrotiterplatte direkt zugeführt werden, oder die Reaktionslösungen müssen zunächst in entsprechende Röhrchen pipettiert werden (hierbei auf die korrekte Beschriftung der Röhrchen achten!). Die Messung am Durchflusszytometer wird entsprechend den Herstellerangaben durchgeführt. Bei Röhrchenzufuhr-Durchflusszytometern ist es notwendig die Messungen der Proben aus der Mikrotiterplatte spaltenweise (A1–H1, A2–H2, …, A12–H12) nicht zeilenweise durchzuführen und die Dateinamen zu jeder Messung sorgfältig zu dokumentieren. Die Verwendung eines Pipettierplans ist dringend zu empfehlen. Als Messmethode muss die mit Hilfe des SERION Multianalyt Setup erstellte Messmethode ausgewählt werden. Nur so kann eine korrekte Parametrisierung des Durchflusszytometers gewährleistet werden. Der Messvorgang sollte innerhalb eines Tages nach Beendigung des letzten Waschzyklus begonnen werden. deutsch 19
Pos: 30 /- - - - - Seitenumbruch - - - - - @ 0\mod_1182493901393_6.doc @ 1908 Die Wartungs- und Kalibriervorschriften des Herstellers müssen beachtet werden. Das Durchflusszytometer muss mit dem SERION Multianalyt Setup eingestellt sein. In Röhrchen pipettierte Partikel aus der Mikrotiterplatte müssen spaltenweise gemessen werden. Die Probenposition, der Probenname und der Dateiname der Messung müssen sorgfältig dokumentiert werden. deutsch 20
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