1 Die subzelluläre Lokalisation und Wirkung auf a-Tubulin von ...

Material: 50xTAE-Puffer: 242g Tris-Puffer
14,7g EDTA
57,1ml Eisessig
Gelmix für Elektrophorese:
1,5g Agarose
100ml TAE-Puffer
Elektrophorese Loading Buffer: 4g Sucrose
2M TrisHCL
0,25M EDTA
4mg Brohmphenol
Ethidiumbromid-Stocklösung: 10mg Ethidiumbromid/ 1 ml H 2 0
Durchführung:
Der vorbereitete Gelmix wurde in einer Mikrowelle kurz zum Kochen
gebracht und sofort in die Formschale für die Elektrophoresekammer
gegossen. Nach dem Einstecken des Kammes, der schmale Kammern in das
Gel modelliert, konnte das Agarosegel aushärten. In eine solche Kammer
wurden anschließend 20µl des PCR-Produktes und 3µl Loading Buffer
hinzupipettiert. Der Laufpuffer wurde durch Verdünnung aus 50xTAE-
Stammlösung hergestellt. Die Elektrophoresekammer wurde damit befüllt
bis das Gel vollständig vom Puffer umschlossen war. An die Elektroden der
Kammer wurde ein Spannung von 85 Volt für 30 Minuten angelegt. Nach
deren Ablauf wurde das Gel aus der Kammer entnommen und in einer
Lösung aus 100µl der Ethidiumbromid-Stocklösung auf 1l Aqua dest. für 15
Minuten lichtgeschützt inkubiert. Unter UV-Licht konnten die einzelnen
Banden sichtbar gemacht werden. Die Bande der gewünschten Länge, hier
2,2 Kb, musste sorgfältig mit einem Skalpell ausgeschnitten und die darin
enhaltene DNA aufgereinigt werden.
3.2.2.2 Aufreinigen des PCR-Produktes aus der Elektrophorese
Material: Zymo Zymoclean Gel Extraction Kit (Cat.-Nr. 04001)
enthält: ADB-Puffer
Waschpuffer
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