1 Die subzelluläre Lokalisation und Wirkung auf a-Tubulin von ...

5 Diskussion
5.1 Lokalisation des Spastins
Mit den GFP-Konstrukten von Spastin und dessen Mutationen konnten die bereits
vorliegenden Daten anderer Arbeiten zu deren Lokalisation nachvollzogen werden (Errico et
al. 2002, McDermott et al. 2003). So zeigte der Wildtyp bei der fluoreszenzmikroskopischen
Auswertung mit einem konfokalen Lasermikroskop eine kräftige, punktförmige Verteilung in
einer engen Zone um den Kern. Es konnte aber keinerlei GFP-Aktivität innerhalb des Kerns
beobachtet werden. Diese zytoplasmatische Verteilung ließ sich genauso beim GFP-Konstrukt
von S44L beobachten. Dagegen wich das Konstrukt mit K388R von dieser Verteilung ab.
Zwar war auch diese Mutante nur außerhalb des Kerns lokalisiert, sie zeigte jedoch keine
punktförmige, sondern eine wolkige, verzweigte Verteilung, die sich relativ eng um den Kern
spannte. Die AAA-Domäne ist in dieser Proteinklasse für die Umsetzung von ATP
verantwortlich. Durch die Mutation in der Domäne bei K388R verliert das Protein diese
Fähigkeit und kann sich so nicht mehr aus seiner Bindung an die Zielstruktur lösen (Errico et
al. 2002). Die für die einzelnen Fusionsproteine beschriebenen Verteilungen änderten sich
auch nicht in Abhängigkeit davon, ob das GFP ans N- oder C-terminale Ende des Gens bzw.
seiner Mutationen fusioniert wurde. Die Verteilungsmuster, zytoplasmatisch und perinukleär,
blieben unabhängig von der eingesetzten Zelllinie bzw. einer neuronalen Differenzierung bei
St14A, gleich. Diese Muster lassen an eine mögliche Co-Lokalisation mit dem kernnahen
Zytoskelett denken. Zellen, die K388R-GFP überexprimierten und deren α-Tubulin markiert
war, zeigten eine weitgehende Überlagerung beider Fluoreszenzen. Zwischenzeitlich konnte
eine Arbeitsgruppe auch eine konkrete Bindungstelle für Mikrotubuli beim Spastin
nachweisen. Diese Domäne wird MIT (microtubule interakting and trafficking molecules)
genannt (Ciccarelli et al. 2003).
Bei den GFP-Fusionsproteinen mit Spastin und den eingesetzten Mutationen war in den
durchgeführten Versuchen nur im perinukleären Zytosol Aktivität nachzuweisen. Eine
Arbeitsgruppe um Charvin beobachtete aber eine reine Kernlokalisation von Spastin. Hierbei
wurden zwei verschiedene Peptidantikörper in einem zellulären „in vivo“ Modell eingesetzt
(Charvin et al. 2003).
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