1 Die subzelluläre Lokalisation und Wirkung auf a-Tubulin von ...

4.4 Zusammenfassung der Ergebnisse
Im Bezug auf die Lokalisation konnten mit den GFP-Fusionsproteinen eine extranukleäre
Verteilung beobachtet werden. Die spezifischen Verteilungsmuster variierten zum Teil
erheblich. Während das Wildtyp-GFP sich genauso wie die S44L-GFP in „spots“ ringförmig
um den Kern lagerte, zeigte sich das K388R-GFP-Protein in einer wolkigen Verteilung um
den Nukleus. Das Tubulin zeigte in Zellen die mit dem Wildtyp-GFP transfiziert waren, eine
deutliche Reduktion des Tubulins im Vergleich mit nicht-transfizierten Zellen. Dieser Effekt
konnte auch bei S44L beobachtet werden. Bei der K388R-Mutante war keine Verringerung
von Tubulin nachweisbar. Die genannten Beobachtungen waren in allen eingesetzten
Zelllinien, bei St14A-Zellen in proliferativer und neuronaler Differenzierung, zu machen. Es
gab keinen signifikanten Unterschied zwischen C- oder N-terminal fusionierten GFP. In der
Tabelle 3.1 sind die Ergebnisse für die GFP-Konstrukte in einer Übersicht aufgeführt.
Mit Hilfe von Peptidantikörper konnte Spastin sowohl im Kern wie auch im Zytoplasma
nachgewiesen werden. Zwar war eine perinukleäre Verdichtung zu sehen, aber die Verteilung
zog sich weit in das Zytoplasma. Hela-Zellen, die Spastin-GFP-Konstrukte überexprimierten
und die mit Spastin Antikörpern inkubiert wurden, zeigten eine gemeinsame perinukleäre
Verdichtung der jeweiligen Verteilungen. Aber während das Fusionsprotein eine rein
zytoplasmatische Lokalisation zeigte, waren die Antikörper auch im Kern nachweisbar.
45