1 Die subzelluläre Lokalisation und Wirkung auf a-Tubulin von ...

4.2.3 GFP-Konstrukte mit K388R
In diesem Konstrukt trug das Spastin eine Mutation, wie sie in symptomatischen
Erkrankungen vorkommt. Es handelte sich um eine Punktmutation innerhalb der AAA-
Kassette, die zu einem Austausch an Position 388 von Lysin zu Arginin führt. Es war keine
Aktivität des Fusionsproteins im Kern nachweisbar. Es zeigte sich eine wolkig durch das
ganze Zytosol ziehende Verteilung mit starker Betonung des perinukleären Bereiches. Diese
Verteilung, starke Aktivität in einem dichten Bereich um den Kern, die zur Zellperipherie
abnimmt, wäre durchaus typisch für das Zellskelett. Eine Verminderung von Tubulin war in
den transfizierten Zellen nicht festzustellen. Die Transfektionsrate lag für Hela und B16 bei
ca. 18%, für St14A wieder nur bei Einzelfällen.
Abbildung 7: Die Abbildungen zeigen Zellen die mit K388R-GFP-Konstrukten transfiziert wurden. Die
Verteilung des Konstrukts zieht sich wolkig durchs Zytoplasma, mit Betonung des perinukleären
Bereichs. a) und b) Hela-Zellen mit N-terminal fusioniertem GFP. c) C-terminal fusionierten Protein in
Hela. d), e) und f) zeigen B16-Zellen, die ersten beiden mit N-terminal fusionierten K388R, die letztere
mit C-terminal fusioniertem K388R. g) St14A-Zellen bei 39°C mit N-terminalem GFP-K388R Konstrukt.
Die Markierung des α-Tubulin zeigte keine Abschwächung in transfizierten Zellen. h) St14A-Zelle bei
33°C mit K388R mit N-terminalen GFP, i) Hela-Zellen mit K388R mit N-terminalen GFP.
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