Stefanie Lapp Ha - TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule ...

Material und Methoden 33
3. Material und Methoden
3.1. Allgemeiner Versuchsaufbau
Es wurden zwei verschiedene Versuchsansätze gewählt. Zum einen wurden Xenotransplanate
aus Zellen der Makrophagen- / Monozytenzelllinie DH82 in Scid-
Mäusen generiert, welche, nach Erreichen eines festgelegten Zeitpunktes,
intratumoral, einfach bzw. zehnfach mit CDV-Ond infiziert wurden. Zum anderen
entstanden aus der Transplantation von DH82-Zellen, welche persistierend mit den
CDV-Ond infizierten waren, persistierend infizierte Xenotransplantate. Es erfolgte, je
Tier und Zelllinie, eine einmalige Transplantation von 3x10 6 Zellen in einem Volumen
von 100 Mikroliter (µl) Zellkulturmedium (siehe Unterabschnitt 3.3). Vergleichende in
vivo- und post mortem- Untersuchungen der Tumorvolumina schlossen sich an.
Weiterhin wurden die Tumoren, welche aus den persistierend infizierten Zellen
entstanden waren, im Vergleich zu Tumoren, welche von nicht-infizierten Zellen
ausgingen, inklusive ihrer Tumormikromilieus histologisch und immunhistologisch
untersucht.
3.1.1. Tierversuchsplan: DH82-Transplantate mit intratumoraler Injektion
von CDV-Ond
Jede Versuchsgruppe bestand aus 6 weiblichen Scid-Mäusen. Die
Eingewöhnungszeit der Tiere von 2 Wochen wurde für die zellkulturellen Vorarbeiten
der Transplantation genutzt. Der Versuch begann an Tag 0 mit der Transplantation
von DH82-Tumorzellen bzw. der Mock-Transplantation von 100 µl serumfreien
Zellkulturmediums. Im Folgenden sollten die entstandenen Tumoren intratumoral
injiziert werden. Der Zeitpunkt der intratumoralen Injektion, bzw. der ersten von
maximal 10 intratumoralen Injektionen, war festgelegt worden als der Tag, an dem
die Tumoren einen Durchmesser von 0,5 cm bzw. ein Volumen von circa 0,06 cm 3
haben würden. Basierend auf den Erkenntnissen eines Vorversuches zur
Schnelligkeit der Tumorentwicklung aus transplantierten, unbehandelten DH82-
Zellen wurde, unter Anderem zur Vereinfachung der Praktikabilität, hierfür der Tag 35
nach der Transplantation gewählt.