Die Untersuchung des immunoliposomalen Targetings von ...

2.4. Ziele dieser Arbeit
Selektine stellen aufgrund ihrer initialen und zentralen Rolle in der Adhäsionskaskade
der Leukozyten ideale Targetmoleküle für eine gezielte Akkumulation antiinflammatorischer
Wirkstoffe dar. Als Zielstruktur scheint E-Selektin besonders geeignet zu sein, da es im
Gegensatz zu L-Selektin nicht konstitutiv vorliegt, und im Gegensatz zu P-Selektin eine
längere Expressionszeit innerhalb einer Entzündungsreaktion aufweist. Als Wirkstoff-
Transport-Systeme haben sich Liposomen bewährt. Mit dem Einsatz von E-Selektin-
Antikörpern als spezifische Ligandstruktur auf der Oberfläche der Liposomen können Drug-
Carrier-Systeme mit höchster Zielspezifität erhalten werden. Die Immunoliposomen müssen
dabei zum Erreichen ihrer Zielobjekte nicht das Gefäßsystem verlassen, so dass das Problem
der geringen Extravasation und des sich daraus ergebenden Zutritts der Immunoliposomen an
die Liganden der Endothelzellen entfallen würde. Das Gesamtziel dieser Arbeit bestand
einerseits in der Erfassung der Liposomen-Zell-Wechselwirkungen (Bindungs- und
Internalisierungsprozesse) zwischen sterisch stabilisierten selektingerichteten
Immunoliposomen und aktivierten Endothelzellen unter in-vitro-Bedingungen und
andererseits der Beweis der intrazellulären Wirkung der darin verkapselten Stoffe nach
zellulärer Aufnahme durch die Endothelzellen.
In einem ersten Schritt sollten dafür Immunoliposomen hergestellt werden, die einer
späteren Anwendung Rechnung tragend eine sterische Stabilisierung aufweisen. Der Erhalt
der Targetspezifität solcher Vehikel trotz Modifikation mit PEG-Ketten stand dabei im
Vordergrund. Durch den Einsatz unterschiedlicher Typen von Kopplungsankern konnten
Erkenntnisse für spätere in-vivo-Einsätze gewonnen werden. In-vitro-Studien zur
quantitativen Ermittlung höchster Bindungsanteile sollten sich anschließen. Dabei wurden
sowohl der Antikörperstatus, der Kopplungsanker und die sterische Stabilisierung der
Liposomen variiert und deren mögliche Abhängigkeit auf Bindungsereignisse untersucht.
Die alleinige Akkumulation von Immunoliposomen am entzündeten Endothel stellt
noch keinen Garant für das Einsetzen eines therapeutischen Effekts des transportierten
Wirkstoffes dar. Deshalb musste in einem zweiten Schritt das Internalisierungsverhalten der
gebundenen Immunoliposomen untersucht werden. Die Aufklärung des zellulären Aufnahmemechanismus
für selektingerichtete Immunoliposomen wurde als Teilziel formuliert.
Während dieser Arbeiten wurden neue Probleme in Form intrazellulärer Abbaumechanismen
für internalisierte Liposomen sichtbar. Eine spezielle Lipidzusammensetzung sollte die
aufgenommenen Immunoliposomen vor dem Schicksal einer späteren lysosomalen
Degradation bewahren. Die Funktions- und Einsatzfähigkeit der sterisch stabilisierten pHsensitiven
Immunoliposomen musste in weiteren Untersuchungen erbracht werden.
Die Anwendbarkeit dieses Carrier-Systems auf aktuelle antiinflammatorische
Forschungsansätze zeigte, dass ein Einsatz im Rahmen der Gentherapie nicht ohne weitere
Modifizierungen übertragbar ist. Einen Einsatz der sterisch stabilisierten pH-sensitiven
Immunoliposomen als System für erfolgreichen Gentransfer an humanen Endothelzellen
sollte deshalb als Endziel dieser Arbeit formuliert werden. Für die Umsetzung mussten neue
Herstellungstechniken auf bereits gesicherte Ergebnisse der Bindungs- und
Internalisierungsstudien der Immunoliposomen übertragen und mit diesen verknüpft werden.
Transfektionsversuche sollte abschließend die Wirksamkeit des liposomalen Systems
bewiesen können.
2.4. Ziele dieser Arbeit
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