Die Untersuchung des immunoliposomalen Targetings von ...

Liposomen bei 4°C für stattfindende Bindungsprozesse inkubiert. Entsprechend der geringen
Zeitabhängigkeit (Kapitel 4.2.1.) wurde diese Inkubation nach 30 Minuten abgestoppt. Nach
dem Abspülprozess nichtassoziierter Anteile wurde im Brutschrank weiter inkubiert. Nach
diesem Zeitraum wurde die Fluoreszenz das erste Mal gemessen. Der so ermittelte
Liposomenanteil setzte sich aus assoziierten und internalisierten Liposomen zusammen. Um
den gebundenen Anteil zu eliminieren, wurde nun die Dithionit-Technik angewendet.
Zugegebenes Dithionit reduzierte alle frei zugänglichen Farbstoffmoleküle. Die oberflächig
gebundenen Immunoliposomen mit ihren in der Außenmonolayer verteilten NBD-Anteilen
wurden deshalb in ihrer Fluoreszenz gelöscht. Die zweite Fluoreszenzmessung symbolisierte
den aufgenommenen Anteil an Immunoliposomen. In der Abbildung 14 sind diese
Internalisierungsraten dargestellt.
Internalisierung [%]
100
80
60
40
20
0
ungekoppelte Liposomen
unspez. hum. IgG IL
Anti-E-Selektin-IgG IL
N-Glut-PE N-Glut-PE + 5mol%PEG Cyanur-PEG-PE
Kopplungsanker
Abb. 14: Abhängigkeit der Internalisierung von Kopplungsanker und Antikörper
Wenn man diese Ergebnisse mit den Bindungsraten in Abbildung 6 vergleicht, so sind
in der Grundtendenz keine nennenswerten Unterschiede zu erkennen. Das Verhältnis
untereinander bleibt bestehen (spez. Immunoliposomen mit N-Glut-PE = 100%). Aus diesen
Erkenntnissen kann geschlussfolgert werden, dass sich das reine Internalisierungsverhalten
der Endothelzellen gegenüber den Liposomen nicht verändert. Die quantitative Aufnahme ist
vom eingesetzten Kopplungsanker und Antikörper unabhängig für alle Liposomen nahezu
gleich. Die hier erkennbaren Aufnahmeunterschiede resultieren aus den vorher stattgefundenen
Bindungen. Im Vergleich zur quantitativen Erfassung der Bindungsereignisse
konnte eine insgesamt 25%-ige Aufnahme der gebundenen Immunoliposomen festgestellt
werden. Das bedeutet, dass von den 8800 gebundenen Immunoliposomen 2200 Vesikel das
Innere einer jeden Endothelzelle erreicht haben. Eine spätere therapeutisch angestrebte
Wirkung kann nur von diesem Anteil ausgehen.
Aus den Aufnahmeversuchen wird weiterhin deutlich, dass die Kopplung eines
Antikörpers an ein Liposom keinen Aufnahmevorteil bewirkt. Das spricht gegen eine aktive
4.2. In-vitro-Studien von Liposomen an Endothelzellen
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