Die Untersuchung des immunoliposomalen Targetings von ...

weiteres Experiment belegt. Eine identische Versuchsdurchführung wurde deshalb an
unstimulierten Endothelzellen durchgeführt. Abbildung 7 zeigt die Ergebnisse. Dabei stellte
sich heraus, dass der erhöhte Bindungsanteil der spezifisch gerichteten Immunoliposomen fast
gänzlich verschwand. Er betrug nur noch 10%. Diese Abnahme zeigte eindeutig die
zwingende Notwendigkeit des Vorhandenseins von E-Selektin auf der Oberfläche der
Endothelzellen, um ein erfolgreiches Drug Targeting erreichen zu können.
Bindung [%]
unstimulierte HUVEC
80
60
40
20
0
ungekoppelte Liposomen
unspez. hum. IgG IL
Anti-E-Selektin-IgG IL
N-Glut-PE Cyanur-PEG-PE
Kopplungsanker
Abb. 7: Abhängigkeit der Bindungsereignisse zw. Liposomen und unstimulierten
HUVEC von der Art des eingesetzten Kopplungsankers und Antikörpers
Ein weiterer Beweis dafür, dass die erhöhten Bindungsanteile der spezifisch gerichteten
Immunoliposomen direkt von der Anwesenheit des E-Selektins auf der Endothelzelloberfläche
abhängig sind, zeigen Bindungsversuche in Anwesenheit freier E-Selektin-
Antikörper. Dazu wurde der spezifische monoklonale Antikörper Anti-Human-E-Selektin
(mAB-BBA 26) den Zellen innerhalb einer Vorinkubation von 30 Minuten zugesetzt
(50µg/ml). Danach schloss sich ein normaler Bindungsversuch an. Auch bei dieser
Durchführung ging der Bindungsvorteil der spezifisch gekoppelten Immunoliposomen nahezu
verloren. Die Bindungsstelle auf der Zellmembran für die gekoppelten Antikörper der
Immunoliposomen ist durch den zugegebenen freien Antikörper schon besetzt gewesen
[Spragg et al. (1997)]. Bei den ungekoppelten Liposomen kam es trotz der Vorinkubation mit
freiem Antikörpers nicht zu einer Veränderung der Bindungswerte (nicht dargestellt). Die
besseren Bindungsergebnisse der spezifisch gerichteten Immunoliposomen sind somit auf
Zielorientiertheit und Aktivierungsstatus zurückzuführen.
4.2. In-vitro-Studien von Liposomen an Endothelzellen
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