Die Untersuchung des immunoliposomalen Targetings von ...

mit dem eingesetzten Inhibitor in Zusammenhang gebracht werden. Der Einsatz von
Cytochalasin bewirkte bei den ungekoppelten Liposomen und bei den unspezifisch
gerichteten Immunoliposomen eine beachtliche Reduzierung der zellulären Aufnahme um bis
zu 50%, wohingegen die Abnahme der spezifisch gerichteten Immunoliposomen nur bei
knapp 15% lag. Es wird dadurch zum ersten Mal deutlich, dass Unterschiede im Internalisierungsmechanismus
bestehen. Die Immunoliposomen, die ihre Bindungsereignisse
hauptsächlich über spezifische Rezeptor-Antikörper-Komplexe ausüben, werden nicht so
stark über aktinabhängige Phagozytoseprozesse aufgenommen. Nichtfunktionalisierte
Liposomen werden dahingehend vermehrt über diesen Aufnahmemechanismus internalisiert.
Die Betrachtung der Aufnahmeraten nach erfolgter Reduzierung der zellulären metabolischen
Aktivität zeigt im Vergleich zu unbehandelten Zellen nahezu bei allen Liposomenarten eine
30%-ige Abnahme der Aufnahme durch die Zelle. Diese Abhängigkeit wurde schon häufig
untersucht und spiegelt sich in vielen Studien liposomaler Versuche wider [Lee et al. (1993),
Simoes et al. (1999)], wobei klar eine Dosisabhängigkeit dieser Aufnahmereduzierung
festgestellt werden konnte. Hier kann sogar geschlussfolgert werden, dass die Gesamtabnahme
der Internalisierung durch beide Ergebnisse (Antimycin A und Formaldehyd/Natriumazid)
addiert werden kann. So würde die Abnahme durch metabolische
Inhibitoren, die sowohl unspezifische als auch spezifische Internalisierungsprozesse hemmen
können, fast 70% betragen. Eine vollständige Hemmung aller Aufnahmemechanismen durch
die metabolischen Inhibitoren wurde nie gezeigt, was an der Höhe der dafür notwendigen
Konzentration liegt.
Eine Unterscheidung der rezeptorvermittelten spezifischen Internalisierung von der
Phagozytose ist durch die Hemmung der physiologischen Funktion einzelner Clathrinmoleküle
möglich. Normalerweise kommt es durch Bindung eines Liganden an einen
Rezeptor auf der Zelloberfläche zur Anreicherung von Clathrin aus dem Zytoplasma
innerhalb dieser Bereiche. Es folgt die Bildung so genannter "Coated Pits". In einem weiteren
Schritt werden clathrinabhängig Einschnürungen „Clathrin-coated Pits Vesicles“ entstehen.
Ein Kaliumentzug verhindert die Entstehung eines „Clathrin-coated Pits Vesicles“ und damit
die rezeptorgesteuerte Aufnahme der oberflächig gebundenen Immunoliposomen. Studien an
humanen Fibroblasten zeigten nach einer Kaliumverarmung eine 90%-ige Hemmung der
LDL-Internalisierung [Larkin et al. (1985)]. Bei der Anwendung der Methode innerhalb der
Liposomenaufnahme durch Endothelzellen wurde deutlich, dass vorrangig spezifisch
gerichtete Immunoliposomen auf diesem Weg in das Zellinnere gelangen. Einer Reduzierung
um 60% stand nur eine minimale Abnahme um 10-15% auf der Seite der ungekoppelten
Liposomen gegenüber. Die Abnahme der Internalisierung der spezifischen Immunoliposomen
auf das Niveau der ungekoppelten Liposomen machte deutlich, dass nur die spezifischen
Immunoliposomen durch rezeptorvermittelte Aufnahmeprozesse internalisiert wurden.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die Endothelzellen im Vergleich zu anderen
Zelllinien (Makrophagen, Krebszellen etc.) eine relativ schlechte Aufnahmetendenz zeigen.
Die Internalisierung von Liposomen kann zellulär durch verschiedene Prozesse gesteuert
werden. Rezeptorgebundene Immunoliposomen werden einerseits durch rezeptorvermittelte
Endozytose, unspezifisch assoziierte Liposomen andererseits durch Phagozytose
aufgenommen. Die Bedeutung der Selektine lässt einen Schwerpunkt in der Bindungsentstehung
erkennen, wohingegen im Aufnahmeprozess kein quantitativ, selektinvermittelter
Vorteil erkennbar ist.
4.2. In-vitro-Studien von Liposomen an Endothelzellen
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