Die Untersuchung des immunoliposomalen Targetings von ...

Beteiligung des IgG innerhalb des Internalisierungsprozesses und der vermuteten Internalisierungsrolle
des Fc-Rezeptors [Pan et al. (1999)]. Damit wird auch klar, dass das E-Selektin
keine Rolle als möglicher Internalisierungsfaktor besitzt. In welchem Ausmaß Immunoliposomen
internalisiert werden, hängt hier von anderen Faktoren ab. So haben auch
Liposomengröße [Daleke et al. (1990)], Lipidzusammensetzung [Spragg et al. (1997)],
Zelltyp [Lee et al. (1993)] und Zielrezeptor [Vingerhoeds et al. (1996)] entscheidenden
Einfluss auf die Internalisierungsausmaße. Mit der hier durchschnittlich erreichten 25%-igen
Internalisierung zeigten die HUVEC noch ein durchaus akzeptables Aufnahmeverhalten. Die
Aufnahmeraten vieler Krebszelllinien sind bedeutend höher. Auch Versuche an bronchialen
Epithelzellen mit Immunoliposomen gerichtet gegen ICAM-1 zeigten eine Internalisierung
von bis zu 60% und liegen damit im höchsten Aufnahmebereich [Mastrobattista et al (1999)].
Mit der Erkenntnis, dass ca. 25% aller gebundenen Liposomen durch die Endothelzellen
internalisiert werden, kann man trotzdem von einer „E-Selektin“-vermittelten Aufnahme
sprechen. Begründet werden kann diese Aussage mit den schon erläuterten Bindungsvorteilen
innerhalb der spezifisch gerichteten Immunoliposomen gegenüber unfunktionalisierter
Liposomen. Die Rolle des E-Selektins wird in der quantitativen Betrachtung der
Internalisierung nicht deutlich. Unterschiede in der selektinvermittelten Aufnahme sind aber
in den folgenden qualitativen Untersuchungen erkennbar gewesen.
4.2.2.2. Qualitative Studien
Um die Bedeutung des E-Selektins für eine therapeutische Anwendung komplett
erfassen zu können, musste auch dessen Einfluss auf den zellulären Aufnahmemechanismus
für selektingerichtete Immunoliposomen betrachtet werden. Weitere Studien im Rahmen der
liposomalen Aufnahme durch HUVEC sollten deshalb der Aufklärung zellulärer
Internalisierungsmechanismen dienen. Bereits in der Mitte der 70er Jahre wurden erste
Aufnahmestudien durchgeführt [Poste et al. (1976)]. Die zellulären Aufnahmemechanismen
können grundsätzlich in zwei große Bereiche eingeteilt werden. Einerseits kann die Zelle
durch passive Prozesse (Fusion) Stoffe von außen aufnehmen, anderseits ist es ihr über
energieabhängige aktive Prozesse möglich, Stoffe gezielt in das Zellinnere aufzunehmen.
Dazu zählen Prozesse wie Phagozytose, Pinozytose und „coated pit“-Endozytose. Die
Pinozytose (Aufnahme gelöster Stoffe) spielt nur eine untergeordnete Rolle. Es konnte im
Gegensatz zur Pinozytose gezeigt werden, dass die Aufnahme des gleichen gelösten Stoffes
als Inhalt von Liposomen eine 10-fach höhere Aufnahme erfährt [Lee et al. (1993)].
Die Pinozytose zeigt weiterhin den Nachteil des schnellen zellulären Effluxes, was die
Bedeutung der Flüssig-Phasen-Pinozytose als Internalisierungsmechanismus für Liposomen
noch mehr in den Hintergrund geraten lässt. Die Hauptaufnahmemechanismen für Liposomen
stellen demnach Phagozytose und rezeptorvermittelten Endozytose“ dar. Das Ausmaß von
Fusion als passiver Prozess spielt in der Aufnahme von Liposomen nur eine untergeordnete
Rolle. Der Fusionsprozess besitzt als liposomaler Aufnahmemechanismus maximal die
Bedeutung der Pinozytose.
Fusionsnachweis mit Calcein (passive Aufnahme):
Trotz der geringen Bedeutung sollen vor der Aufklärung der aktiven Internalisierungsmechanismen
die Liposom-Zell-Wechselwirkungen auf Fusionsbasis untersucht werden.
4.2. In-vitro-Studien von Liposomen an Endothelzellen
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