Die Untersuchung des immunoliposomalen Targetings von ...

der gemessenen Fluoreszenzwerte auch, dass Fusionsprozesse von der Anwesenheit bzw. der
Art der gekoppelten Antikörper unabhängig stattfinden. Sowohl die ungekoppelten
Liposomen als auch die spezifisch gerichteten Immunoliposomen werden gleich stark über
Fusionsprozesse aufgenommen. Eine Verlängerung der Inkubationszeit auf 120 Minuten
erbrachte keinen weiteren Fluoreszenzanstieg (nicht dargestellt). Als Kontrolle des
Fusionsassays wurde eine weitere Inkubation der Zellen mit Liposomen durchgeführt. Die
Endothelzellen hatten bei 4°C 60 Minuten Zeit, um Fusions- und Bindungsprozesse
(energieunabhängig) eingehen zu können. Nach dem Entfernen der nicht gebundenen Anteile
folgte eine weitere Inkubation bei 37°C.
Fluoreszenzeinheiten
[rel.]
2000
1750
1500
1250
1000
750
500
250
0
ungekoppelte
Liposomen unspez. hum.
IgG IL
Antikörperstatus
Anti-E-Selektin-
IgG IL
1. Messung
2. Messung
Abb. 16: Fusionsnachweis zw. Immunoliposomen und stimulierten HUVEC nach 60
Minuten bei 4°C und weiteren 60 Minuten bei 37°C
Anhand der Abbildung 16 sind die bekannten Unterschiede der Immunoliposomen
wieder zu erkennen. Die gebundenen Liposomen hatten während dieser ersten Inkubation
(4°C 60 Minuten) die Möglichkeit Fusions- und Bindungsvorgänge einzugehen. In dieser
Inkubationsfolge schloss sich aber vor einem „Acid-wash“ ein weiterer Inkubationsschritt bei
37°C an. Nun konnten die Endothelzellen, entgegen eines üblicherweise ablaufenden Fusionsassays,
Liposomen durch aktive Transportprozesse internalisieren. Dabei wurde die schon
bekannte gleichmäßig starke Aufnahme aller Liposomen mit ca. 25% des gebundenen
Anteiles betrachtet. Die erste Messung zeigt eine deutlich höhere Fluoreszenz auf der Seite
der spezifisch gerichteten Immunoliposomen. Erklärbar ist dies durch die schon erwähnte
stärkere spezifische Bindung durch die HUVEC. Die gebundenen Liposomen hatten danach
weitere 60 Minuten Zeit, zu internalisieren. Während dieses Zeitraumes wurde ihr Liposomeninhalt
zum Teil ins Zytosol freigegeben, was sich in dem hohen Fluoreszenzwert der
ersten Messung widerspiegelt. Dass noch nicht alle spezifisch gerichteten Immunoliposomen
innerhalb dieser Zeit intrazellulär abgebaut wurden, beweist die zweite Fluoreszenzmessung.
4.2. In-vitro-Studien von Liposomen an Endothelzellen
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