Die Untersuchung des immunoliposomalen Targetings von ...

Cyanur-PEG-PE als Kopplungsanker. Eine weitere sterische Stabilisierung ist in diesem Fall
nicht notwendig, da der Anker innerhalb des Moleküls schon Polyethylenglykoleinheiten
aufweist. Da beide Typen von Immunoliposomen durch unterschiedliche Lipidanker
charakterisiert sind, wurden sie hinsichtlich ihrer Kopplungsrate gegenüber gestellt. Die
Effizienz einer Proteinkopplungsmethode wird im liposomalen Bereich in µg Protein je µmol
Phospholipid angegeben. In der Abbildung 4 sind die erreichten Kopplungsausbeuten
dargestellt. Mit fast 60µg/µmol zeigt der Anker N-Glut-PE deutlich seine Vorteile gegenüber
dem Cyanur-PEG-PE. Die dort erreichten Kopplungsergebnisse von 42µg/µmol liegen aber
im Vergleich zu etablierten Methoden der Antikörperbindung immer noch in einem Bereich,
der effektives Drug Targeting ermöglicht und Bindungsvorteile durch Antikörpereinsatz
zulässt. In der Darstellung wird auch die Abhängigkeit der Kopplungsausbeute an den Typ 1
Liposomen in Bezug auf gleichzeitig vorhandene PEG-Ketten sichtbar. Nach Einbau von
3mol% PEG-PE ist ein rascher Abfall der gebundenen Proteinmenge zu erkennen. Eine
weitere Erhöhung der Polyethylenglykoleinheiten auf 5mol% des Gesamtlipidgehalts weist
sogar eine Reduzierung anfänglicher Kopplungsmengen um bis zu 65% auf (von 58µg/µmol
ohne PEG-PE auf 20µg/µmol nach Einbau von 5mol% PEG-PE).
Die Notwendigkeit einer sterischen Stabilisierung wurde in ersten in-vivo-Versuchen
mit Liposomen Ende der 80er Jahre deutlich. Konventionelle Liposomen erreichten maximale
Halbwertszeiten von 1 Stunde [Senior (1987)]. Durch die sterische Stabilisierung mit Polyethylenglykol
kommt es auf der Liposomenoberfläche zur Ausbildung einer Schutzschicht
[Woodle et al. (1994)] und der damit verbundenen Halbwertszeitverlängerung. Ein Anteil von
5mol% PEG-PE zeigte dabei die besten Ergebnisse [Maruyama et al. (1991), Klibanov et al.
(1991)] und wurde deshalb im Rahmen dieser Arbeit eingesetzt.
Kopplungsmenge
[µg Protein / µmol PL]
70
60
50
40
30
20
10
0
N-Glut-PE Cyanur-PEG-PE
0 3 5 0
Anteil an PEG-PE [mol%]
Abb. 4: Abhängigkeit der Kopplungsausbeute in Anwesenheit von PEG-PE
Die eingesetzten 5mol% PEG-PE zeigen neben der deutlich sichtbaren Abnahme der
Kopplungsmenge [Bendas et al. (1999)] auch noch einen weiteren Nachteil. Hinsichtlich der
parallelen Anordnung von Antikörpermolekülen und Polyethylenglykolketten kommt es zu
einer gewissen räumlichen Abschirmung der Antikörper. Die voluminösen und flexiblen
4.1. Charakterisierung der Liposomen
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