In vitro quantitation of Theileria parva sporozoites for use - TropMed ...

More documents

Recommendations

Info

Samenvatting 175 ______________________________________________________________________________________________ Hoofdstuk zeven is een verslag van pogingen om stabilaten te vriesdrogen, meer bepaald om een beschreven protocol te herhalen en te verbeteren. Vriesdrogen is potentieel een goedkopere manier om stabilaat te bewaren. Bij een eerdere poging was men er in geslaagd om dieren te infecteren met gelyofiliseerd stabilaat, maar was tevens vastgesteld dat minder dan 1% van de sporozoieten de procedure overleefd hadden. Indien dit kon herhaald worden moest getracht worden om dit rendement te verhogen. Katete en Chitongo T. parva sucrose en trehalose stabilaten werden getest. Tevens werden gehele geïnfecteerde teken, speekselklieren van teken en stabilaatgruis gelyofiliseerd. In geen enkele combinatie werden leefbare sporozoieten gevonden. Mogelijke redenen van dit falen worden besproken. In hoofdstuk acht wordt de optimalisatie van de Sporozoiet Neutralisatie Test (SNT) beschreven en getest aan de hand van verschillende sera. Momenteel is SNT gebaseerd op een telling van geïnfecteerde cellen, wat een tijdrovende en subjectieve bezigheid is. Voorgesteld wordt om testplaat wells in te delen in positieve en negatieve wells. Dit is een meer gebruikersvriendelijke methode met binaire resultaten die kunnen geanalyseerd worden in een logistische regressie. Dit hoofdstuk beargumenteert ook het gebruik van microtitratie platen in plaats van microtubes voor in vitro titraties. Door de platen gedurende één minuut te schudden en de target cellen in de koelkast te bewaren vóór infectie in plaats van bewaring bij 37°C, bleek het resultaat minstens zo efficiënt te zijn als datgene van de oorspronkelijke methode. Bovendien werd een snellere methode om platen te lezen door PCR geëvalueerd. Tenslotte werd de in vitro procedure ingekort met 48 uur door het gebruik van een mitogeen (Concavalin A) om PBM-celculturen op te starten, achterwege te laten. Sera van runderen, experimenteel geïnfecteerd met levende sporozoieten, dode sporozoieten of lymfoblasten geparasiteerd door schizonten, werden wekelijks in parallel getest tegenover een positieve (anti-p67) en een negatieve (FCS) controle. De sera werden tevens getest in een PIM- ELISA, p67-ELISA en een SELISA met geparasiteerde lymfoblasten als antigen. Geen significante sporozoiet inhibitie werd vastgesteld bij de drie sera, ondanks dat een duidelijk verschil met de controles werd waargenomen. Serum van het dier, geïnfecteerd met levende sporozoieten, reageerde positief in de drie serologische testen. Serum van het schizont geïnfecteerde dier reageerde positief in de SELISA en PIM-ELISA. Het gebrek aan sporozoiet neutralisatie in serum van het rund, dat verschillende malen geïnoculeerd werd met schizonten, toont tevens de voorheen beschreven lage p67 expressie in schizonten aan. Anti-PIM sera blijken verder inefficiënt te zijn voor sporozoiet neutralisatie en de SNT is specifiek voor anti-p67 antilichamen.
176 Samenvatting ______________________________________________________________________________________________ De voornaamste resultaten worden samengevat en besproken in hoofdstuk negen met daarbij de algemene conclusies. Hierin worden eveneens aanbevelingen geformuleerd voor verder onderzoek teneinde vragen en veronderstellingen geopperd in dit werk op te helderen.
Page 1 and 2:
Victor Mbao In vitro quantitation o
Page 3 and 4:
II Front cover photograph Copyright
Page 6 and 7:
V ACKNOWLEDGEMENTS This work was ma
Page 8 and 9:
VII TABLE OF CONTENTS ACKNOWLEDGEME
Page 10:
IX APPENDIX I .....................
Page 14 and 15:
General Introduction 13 ___________
Page 16 and 17:
General Introduction 15 ___________
Page 18:
Chapter 1 - Quantitation of Theiler
Page 21 and 22:
20 Chapter 1: Quantitation of Theil
Page 23 and 24:
Page 25 and 26:
Page 27 and 28:
Page 29 and 30:
Page 31 and 32:
Page 33 and 34:
Page 35 and 36:
Page 37 and 38:
Page 39 and 40:
Page 41 and 42:
Page 44 and 45:
Chapter 2: Objectives 43 __________
Page 46:
Chapter 3 -Comparison of two Theile
Page 49 and 50:
48 Chapter 3: Theileria parva extra
Page 51 and 52:
Page 53 and 54:
Page 55 and 56:
Page 58 and 59:
Chapter 4: Suspension media and mul
Page 60 and 61:
Page 62 and 63:
Page 64 and 65:
Page 66 and 67:
Page 68:
Chapter 5 - Snap freezing of Theile
Page 71 and 72:
70 Chapter 5: Snap freezing of Thei
Page 73 and 74:
Page 75 and 76:
Page 78 and 79:
Chapter 6: Storage of Theileria par
Page 80 and 81:
Page 82 and 83:
Page 84 and 85:
Page 86 and 87:
Page 88 and 89:
Page 90:
Page 94 and 95:
Chapter 7: Lyophilisation of Theile
Page 96 and 97:
Page 98 and 99:
Page 100:
Page 104 and 105:
Chapter 8: SNA and refinement of ti
Page 106 and 107:
Page 108 and 109:
Page 110 and 111:
Page 112 and 113:
Page 114 and 115:
Page 116:
Page 120 and 121:
Chapter 9: General Discussion 119 _
Page 122 and 123:
Page 124 and 125:
Page 126: Chapter 9: General Discussion 125 _
Page 130 and 131: References 129 ____________________
Page 148: APPENDICES
Page 151 and 152: 150 Appendices ____________________
Page 166: SUMMARY
Page 169 and 170: 168 Summary _______________________
Page 171 and 172: 170 Summary _______________________
Page 174 and 175: Samenvatting 173 __________________
Page 178: Curriculum Vitae
Page 181 and 182: 180 Carriculum Vitae ______________
Page 184 and 185: List of Abbreviations 183 _________
show all

In vitro quantitation of Theileria parva sporozoites for use - TropMed ...

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?